佐太和HgS对药物代谢酶和转运体基因表达的影响(1)
[摘要]藏药佐太(主要含βHgS)和中药朱砂(96%HgS)是传统医药中的配伍成分，其含重金属(汞)的安全问题和中西药合用时的相互作用问题日益受到关注。本实验就其对药物代谢基因的影響进行了研究。小鼠连续7 d口服给予不同剂量佐太、HgS(10，30，100，300 mg·kg-1)，或氯化汞(HgCl2，336 mg·kg-1)，RTPCR检测药物代谢酶和转运体蛋白相关基因表达。佐太和HgS对Ⅰ相(CYP1A2，CYP2B10，CYP3A11，CYP4A10)和Ⅱ相(UGT1A1，UGT2A3，SULT1A1，SULT2A1)药物代谢酶以及转运体蛋白(OATP1A1，OATP1A4，OATP1B2，OATP2B1，MRP1，MRP2，MRP3，MRP4)均无明显影响，而HgCl2显著上调CYP2B10，CYP4A10，UGT1A1，UGT2A3，SULT1A1，SULT2A1，OATP1A4，MRP1，MRP3，MRP4，对OATP1A1有抑制作用。综上，佐太和HgS在300 mg·kg-1的剂量下对肝脏代谢基因的表达没有产生明显的影响，而1/10等汞量的HgCl2则明显上调或改变Ⅰ相、Ⅱ相药物代谢基因和转运体基因的表达。
[关键词]佐太； HgS； 氯化汞； 药物代谢酶； 药物转运体； RTPCR
[Abstract]Zuotai and cinnabar(96%HgS) are contained in many traditional medicines To examine their potential effects on drug metabolism genes， mice were orally given Zuotai or HgS at doses of 10， 30， 100， 300 mg·kg-1 for 7 days HgCl2(336 mg·kg-1) was gavaged for control Twentyfour hour later after the last administration， livers were collected， and expressions of genes related to metabolic enzymes and transporters were examined Zuotai and HgS had no effects on major phase1， phase2 and transporter genes； HgCl2 increased the expressions of CYP2B10， CYP4A10， OATP1A4， UGT1A1， UGT2A3， SULT1A1， SULT2A1， MRP1， MRP3 and MRP4； expression of OATP1A1 was decreased by HgCl2， but not by Zuotai and HgS Therefore， Zuotai and HgS have different adverse effects on drugmetabolizing genes from HgCl2.
[Key words]Zuotai； HgS； HgCl2； drugmetabolizing enzyme； drug transporter； RTPCR
藏医药是世界传统医学中的重要组成部分，迄今已有上千年的使用历史，是我国较为完整且具有影响的民族药之一[12]。佐太是藏药中最为核心的贵重药物[1，34]，是许多名贵藏成药中的主要原料药之一，如七十味珍珠丸、二十五味松石丸等。朱砂首载于《神农本草经》中，称之为丹砂[5]，其用药已有2 000多年历史，约7%的中成药品种中都含有朱砂[6]，如朱砂安神丸、益元散、补心丸等。因佐太主要成分是硫化汞(βHgS)，属于含重金属藏药的典型代表；而朱砂主要化学成分为硫化汞(96%αHgS)。因此，佐太与朱砂的安全问题和中西药合用时的相互作用问题日益受到关注[711]。但是，汞是重金属物质，其毒性是毋庸置疑的，而佐太与朱砂中主要成分βHgS，αHgS与有毒汞化合物的安全性及其与药物的相互作用是不一样的[12]。
药物代谢酶及转运体是决定药物体内吸收、分布、代谢、排泄、毒性与药效过程(ADMET/Act过程)的关键因素，药物对其抑制或诱导效应是产生药动学相互作用的重要机制[13]。药物相互作用是中药副作用的一个重要因素[14]，而佐太和朱砂常配伍传统药物使用，与现代药物合用也越来越多，因此，阐明佐太和朱砂(HgS)对药物代谢酶基因和转运体基因的表达，对于传统药物的基础理论发展和临床上的指导具有重要意义。但佐太和朱砂对药物代谢基因的影响鲜有报道，故本实验在研究其毒性基础上[1112]进一步研究佐太和HgS对肝脏Ⅰ相、Ⅱ相、Ⅲ相代谢基因的影响。
1材料
11动物成年昆明雄性小鼠(25±2) g，购自重庆第三军医大学实验动物中心，合格证号SCXK(渝)20120005，在SPF级动物房适应性饲养1周后用于实验。
12药物和试剂藏药佐太由中国科学院西北高原生物研究所提供；硫化汞(HgS)和氯化汞(HgCl2)购买于SigmaAldrich公司；RNAiso Plus，PCR引物购自大连宝生物工程有限公司；High Capacity cDNA Reverse Transcription Kits为美国Applied Biosystems公司产品；iQTM SYBRGreen SuperMix购自美国BioRad公司；mRNA纯化试剂盒购自上海华舜生物技术有限公司。
13仪器CFX connect型实时荧光定量PCR仪(美国BioRad公司)；5417R型台式高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司)；Mastercycler gradient多功能梯度PCR仪(德国Eppendorf公司)；MULTISKAN GO全波长酶标仪(美国Thermo公司)；X15R型冷冻离心机(美国Beckman Coulter公司)；YQ720C型超声波清洗机(中国上海易净超声波仪器公司)。, http://www.100md.com(张斌斌 徐尚福 徐亚沙 陆远富 魏立新 刘杰)
[关键词]佐太； HgS； 氯化汞； 药物代谢酶； 药物转运体； RTPCR
[Abstract]Zuotai and cinnabar(96%HgS) are contained in many traditional medicines To examine their potential effects on drug metabolism genes， mice were orally given Zuotai or HgS at doses of 10， 30， 100， 300 mg·kg-1 for 7 days HgCl2(336 mg·kg-1) was gavaged for control Twentyfour hour later after the last administration， livers were collected， and expressions of genes related to metabolic enzymes and transporters were examined Zuotai and HgS had no effects on major phase1， phase2 and transporter genes； HgCl2 increased the expressions of CYP2B10， CYP4A10， OATP1A4， UGT1A1， UGT2A3， SULT1A1， SULT2A1， MRP1， MRP3 and MRP4； expression of OATP1A1 was decreased by HgCl2， but not by Zuotai and HgS Therefore， Zuotai and HgS have different adverse effects on drugmetabolizing genes from HgCl2.
[Key words]Zuotai； HgS； HgCl2； drugmetabolizing enzyme； drug transporter； RTPCR
藏医药是世界传统医学中的重要组成部分，迄今已有上千年的使用历史，是我国较为完整且具有影响的民族药之一[12]。佐太是藏药中最为核心的贵重药物[1，34]，是许多名贵藏成药中的主要原料药之一，如七十味珍珠丸、二十五味松石丸等。朱砂首载于《神农本草经》中，称之为丹砂[5]，其用药已有2 000多年历史，约7%的中成药品种中都含有朱砂[6]，如朱砂安神丸、益元散、补心丸等。因佐太主要成分是硫化汞(βHgS)，属于含重金属藏药的典型代表；而朱砂主要化学成分为硫化汞(96%αHgS)。因此，佐太与朱砂的安全问题和中西药合用时的相互作用问题日益受到关注[711]。但是，汞是重金属物质，其毒性是毋庸置疑的，而佐太与朱砂中主要成分βHgS，αHgS与有毒汞化合物的安全性及其与药物的相互作用是不一样的[12]。
药物代谢酶及转运体是决定药物体内吸收、分布、代谢、排泄、毒性与药效过程(ADMET/Act过程)的关键因素，药物对其抑制或诱导效应是产生药动学相互作用的重要机制[13]。药物相互作用是中药副作用的一个重要因素[14]，而佐太和朱砂常配伍传统药物使用，与现代药物合用也越来越多，因此，阐明佐太和朱砂(HgS)对药物代谢酶基因和转运体基因的表达，对于传统药物的基础理论发展和临床上的指导具有重要意义。但佐太和朱砂对药物代谢基因的影响鲜有报道，故本实验在研究其毒性基础上[1112]进一步研究佐太和HgS对肝脏Ⅰ相、Ⅱ相、Ⅲ相代谢基因的影响。
1材料
11动物成年昆明雄性小鼠(25±2) g，购自重庆第三军医大学实验动物中心，合格证号SCXK(渝)20120005，在SPF级动物房适应性饲养1周后用于实验。
12药物和试剂藏药佐太由中国科学院西北高原生物研究所提供；硫化汞(HgS)和氯化汞(HgCl2)购买于SigmaAldrich公司；RNAiso Plus，PCR引物购自大连宝生物工程有限公司；High Capacity cDNA Reverse Transcription Kits为美国Applied Biosystems公司产品；iQTM SYBRGreen SuperMix购自美国BioRad公司；mRNA纯化试剂盒购自上海华舜生物技术有限公司。
13仪器CFX connect型实时荧光定量PCR仪(美国BioRad公司)；5417R型台式高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司)；Mastercycler gradient多功能梯度PCR仪(德国Eppendorf公司)；MULTISKAN GO全波长酶标仪(美国Thermo公司)；X15R型冷冻离心机(美国Beckman Coulter公司)；YQ720C型超声波清洗机(中国上海易净超声波仪器公司)。, http://www.100md.com(张斌斌 徐尚福 徐亚沙 陆远富 魏立新 刘杰)