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编号:13211551
川西高原产生物碱暗紫贝母内生放线菌的筛选、鉴定及抑菌活性的测定(3)
http://www.100md.com 2017年12月1日 中国中药杂志 2017年第23期
     对16S rRNA PCR基因的PCR扩增产物进行检测,选用DL 2 000 Maker,用含EB1%的琼脂糖凝胶电泳检测,电泳电压为120 V,电泳时长为30 min,然后把琼脂糖凝胶放在凝胶成像系统UV紫外灯下进行观察,若1.5 kb的位置有条带出现,则意味扩增成功,而后将扩増产物放于-20 ℃冰箱储存备用。

    2.6 内生放线菌生物碱的抑菌活性的测定

    2.6.1 菌悬液的制备 将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、粪肠球菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基,37 ℃活化24 h,白色念珠菌接种于沙氏培养基,35 ℃活化24 h,然后液体培养得到菌悬液。

    2.6.2 抑菌药液的制备 各取初筛呈阳性的300 mL菌株的发酵产物,60 ℃减压浓缩至15 mL,加浓氨水调至pH 9~11,40 mL二氯甲烷萃取2~3次,收集油層,利用物质在碱性溶液中生成易溶物,在酸性溶液中生成沉淀的性质,用碱提取,酸沉淀原理,反复萃取达到提纯分离目的,最后用乙酸乙酯定容至1.50 mL ......
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