半枝莲对AFB1致肝细胞凋亡及脂质过氧化损伤的保护作用(2)
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1.2 半枝莲的醇取：
半枝莲粉碎、过筛，10倍量石油醚回流提取2次，80%乙醇回流提取3次，每次1.5h。回收溶剂至成浓水液。25 g提取物，通过萃取分离。先过滤，留滤渣。使用时用l x PBS稀释至所需的药物浓度。
1.3 细胞培养及处理：
人Huh7.5细胞株常规培养于DMEM培养基(含10%灭活胎牛血清、100U/mL青霉素和100U/mL链霉素，PH7.2)，置37℃、饱和湿度、5% CO2培养箱中孵育，0.1%胰蛋白酶消化传代。实验选用对数生长期细胞。AFB1被溶解在DMSO中，配成1mg/mL的母液。将处于对数生长期的Huh7.5细胞用0.5%的胰蛋白酶消化，用含胎牛血清的培养基制成5 x 104细胞/mL的悬液，以每孔100μL 接种于96孔细胞培养板中，在37℃、5% CO2条件下培养24h。
1.4 AFB1和半枝莲对Huh7.5细胞增殖的影响：
AFB1组：取Huh7.5细胞(100μL)，分别加入含5、10、20、30、40、50μg/mL AFB1的DMEM的培养基，培养24h后用MTT法测570 nm 波长处吸光度(A)值，计算AFB1的细胞增殖抑制率(fa)和中效浓度(IC50)。AFB1+半枝莲组：取Huh7.5细胞(100μL)，细胞贴壁后加入不同浓度半枝莲20ul，使其终浓度分别为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 mg/ml(原药材浓度)，2h后加入15ug/ml (IC50)每个浓度设3个平行孔、同时设置空白对照组、溶剂对照组和调零孔 ......
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