HIV病毒核酸载量检测方法研究进展(2)
2 其它HIV-1病毒载量的方法
除了分枝DNA信号放大系统技术外，核酸扩增技术定量测定血浆HIV-1RNA是使用最广泛方法。近年也对其它方法作了探索。
2.1 HIV-1 RT(逆转录酶)活性的定量检测： 逆转录酶的活性与活病毒颗粒的数量有很好的相关性，测定RT的活性可反映HIV-1活病毒颗粒的数量。以前RT活性测定方法复杂且需同位素，使用受到很大限制。最近发展ELISA法测定RT活性试验，操作简便，价格低廉 [13]。
实验包括病毒颗粒分离和RT活性测定两部分。前者用能结合病毒颗粒的凝胶把病毒从血浆中分离出来，然后把病毒颗粒裂解，收集裂解物用于RT检测。检测程序是：在包被了polyA的孔板中加入RNA模板结合在板底，再加入含有引物和RT底物的混合物，如果有RT活性，将催化合成DNA链，然后加碱性磷酸酶标记的α-BrdU的抗体检测合成产物，再加底物，测定光密度值确定合成的DNA链的量，间接推测RT的活性[14]。经过初步验证，检测灵敏度是0.5gRT∕mL，病毒载量越高，检测RT的阳性率越高。该检测可望用于替代病毒测定。
2.2 血浆HIV-1定量培养：系列稀释的待测血浆与活化的正常人外周血单核细胞(PBMC)共同孵育 ......
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除了分枝DNA信号放大系统技术外，核酸扩增技术定量测定血浆HIV-1RNA是使用最广泛方法。近年也对其它方法作了探索。
2.1 HIV-1 RT(逆转录酶)活性的定量检测： 逆转录酶的活性与活病毒颗粒的数量有很好的相关性，测定RT的活性可反映HIV-1活病毒颗粒的数量。以前RT活性测定方法复杂且需同位素，使用受到很大限制。最近发展ELISA法测定RT活性试验，操作简便，价格低廉 [13]。
实验包括病毒颗粒分离和RT活性测定两部分。前者用能结合病毒颗粒的凝胶把病毒从血浆中分离出来，然后把病毒颗粒裂解，收集裂解物用于RT检测。检测程序是：在包被了polyA的孔板中加入RNA模板结合在板底，再加入含有引物和RT底物的混合物，如果有RT活性，将催化合成DNA链，然后加碱性磷酸酶标记的α-BrdU的抗体检测合成产物，再加底物，测定光密度值确定合成的DNA链的量，间接推测RT的活性[14]。经过初步验证，检测灵敏度是0.5gRT∕mL，病毒载量越高，检测RT的阳性率越高。该检测可望用于替代病毒测定。
2.2 血浆HIV-1定量培养：系列稀释的待测血浆与活化的正常人外周血单核细胞(PBMC)共同孵育 ......
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