2.6CAM成瘤试验按照文献[7]:方法建立裸鼠腋下胰腺癌移植瘤模型,待2周后肿瘤形成并长至一定体积后,称重裸鼠,按1×1012v.g./kg的剂量标准瘤体内多点注射rAAV2-EGFP-slug-siRNA-U6和rAAV2-EGFP,空白对照组只注射生理盐水。次日无菌条件下切取肿瘤组织,剪成1mm3大小的组织块,生理盐水漂洗后接种在CAM的相对无血管区,用灭菌透明胶纸封闭卵壳开口,平放入温箱中继续孵育,停止转蛋,透过胶纸观察成瘤情况,每组制作6个模型。接种7天后,揭去胶纸,加入预冷固定液固定30min ,待CAM血管内的血液完全凝固后完整剪下CAM,然后按照文献[8]方法进行HE染色。镜下观察,照相。

    2.7MTT测定:3组细胞分别消化成单细胞悬液接种于96孔培养板,104细胞/孔,每孔加入200μl含10%FBS的高糖DMEM液,分别培养72h,每组设3个复孔,后续方法参照文献[8]进行,实验重复3次,结果用x±s表示。

    3统计学方法

    应用SPSS 1010软件进行统计学分析,实验结果用x±s表示,采用t检验。

    4结果

    (1)稳定转染后细胞中Slug mRNA表达的变化对照组、shRNA-1、Slug-shRNA-1组细胞Slug mRNA表达水平分别为0.826 ±0.040、0.812 ±0.042、0.1467±0.010,差异有统计学意义( P < 0.05 ),说明Slug-shRNA-1组细胞Slug mRNA表达被有效沉默 ......