重叠延伸ＰＣＲ方法的建立与应用

http://www.100md.com 2005年11月1日 曹 阳 李冬田 尹冰楠 佟惠春

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     [摘要] 目的 建立一种新型PCR技术(重叠延伸PCR)并用于腺病毒早期基因E1A与内核蛋白体进入位点IRES(internaldbosome entrysite)的直接连接，为构建复制型腺病毒载体作准备。方法 以PcAKlA质粒与nRl6—ECl7质粒为模板，通过引物设计，使E1A基因3，端与IRES基因5，端具有相互重叠的一段序列，用该组引物行PCR分别扩增E1A基因与IRES基因，再以这两种PCR产物的混合物作为模板，进行重叠延伸PCR扩增E1A—ImiS基因片段。结果 经酶切及测序鉴定重叠延伸PCR方法成功构建了E1A-IRES基因片段。结论 重叠延伸PCR法能将任意两段DNA序列连接起来，其在分子生物学的领域中具有潜在应用价值。

    [关键词] 重叠延伸聚合酶链式反应；腺病毒载体

    http://www.100md.com/html/paper/1002-7386/2005/11/01.htm

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