文东虎

    (齐齐哈尔医学院附属第一医院 黑龙江 齐齐哈尔 161041)

    白藜芦醇(RSV)是多酚类化合物,又称芪三酚,是肿瘤的化学预防剂，化学名称是3,4,5-三羟基苯二烯[1]。白藜芦可不仅可杀菌，还可抗炎、癌等。最近几年，RSV抗肿瘤作用是研究核心，不同细胞，RSV诱导细胞凋亡机制与之存在很大不同，经研究发现RSV会引起HL-60细胞凋亡，此作用呈时间、剂量是双依赖性，其原理与活性氧(ROS)有联系。但ROS的发生与RSV导致HL-60细胞死亡有联系，本研究经遏制ROS的产生，发现细胞凋亡未得到科学抑制[2]。按此推测，除过ROS将线粒体死亡通路激活外，需与另外路径相结合加入RSV抗肿瘤效用。因此，本研究需结合蛋白组方式分析RSV处理HL-60细胞所有磷酸化蛋白质干扰，初步掌握RSV诱导入HL- 60细胞凋亡的其他理念。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料

    材料：人造幼粒白血病细胞HL-60细胞株。

    仪器和试剂：双向电泳裂解液、水化液，样品混合器、离心机、垂直电泳仪、TPG预制胶条、脱色摇床。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞裂解

    备好量皿处在对数生长阶段的HL-60细胞，一皿细胞中添加白藜芦醇，确保期RSV最终浓度100mol/L，另外一名细胞用于参照。经12h的培养对细胞进行收集，取离心管置入细胞悬液，以500g/min速度离心10min后，将上清液去除，后取冷PBS清洗细胞3次，500g/min，离心10min，放弃上清液。取离心管重新离心，500g/min，共2min，离心后充分吸收液体，一同称取细胞与管，掌握所收到的细胞质量。将收集的细胞置入-80℃冰箱冰冻保存>2h。从冰箱中取出细胞后，等细胞的温度恢复后细胞重悬用缓冲液完成 ......