人幽门螺杆菌热休克蛋白A编码基因的克隆及表达(2)
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参见附件(321KB，3页)。
我们成功地将Hp HspA编码基因进行了克隆，对所构建的重组载体利用重组菌作为模板进行PCR来鉴定，对于PCR阳性的重组菌再进行质粒提取的酶切鉴定和序列分析，提高了重组结果鉴定的效率及准确性。最终经序列分析结果显示HspA基因全长为357 bp，与GenBank 上公布的hspA核酸序列相比同源性为98%左右。
Hp HspA编码基因编码118个氨基酸残基，相对分子质量为13 KD，由于分子量较小，故我们采用原核表达载体pET32a(+)，其主要特点是，除能够编码6个组氨酸残基外，还带有可编码硫氧还蛋白的TrxA基因。外源基因经多克隆位点插入后，可与TrxA基因一起融合表达。融合表达不仅提高了表达产物的稳定性，而且由于相对分子质量增大，SDSPAGE更容易分析鉴定。从SDSPAGE的结果表明，含重组载体的菌体蛋白可见Mr为33 KD的融合蛋白，即硫氧还蛋白HspA的分子量约为33 KD，而含pET32a(+)的菌体蛋白可见Mr约为20 KD的蛋白，与硫氧还蛋白的分子量相符。另外，由于原核表达载体pET32a(+)的6个组氨酸残基可与Ni+NTA琼脂糖树脂中Ni2+结合 ......
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