溶血对乙型肝炎病毒DNA定量检测的影响
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【摘要】 目的 了解用实时荧光定量PCR技术检测乙肝病毒DNA拷贝数时，溶血对乙型肝炎病毒DNA定量检测的影响。
方法 采集30例乙型肝炎患者血液，分离血清，置于-20℃冰箱保存备用，并同时配制出含不同浓度Hb血清管。采用实时荧光定量PCR方法，检测含不同Hb浓度及不含Hb血清的乙型肝炎病毒DNA拷贝数，用配对t检验进行统计处理。结果 当标本中Hb浓度小于32 g/L时，Hb对检测血清乙型肝炎病毒DNA拷贝数无显著影响(P>0.05)。结论 当Hb浓度较低时，Hb对血清乙型肝炎病毒DNA定量检测无显著影响，因此较低浓度溶血标本可以进行乙型肝炎病毒DNA的定量检测。
【关键词】 乙型肝炎病毒；DNA定量；溶血；PCR
文章编号：1003-1383(2008)01-0053-02中图分类号：R 620.446.11文献标识码：A
血清中乙型肝炎病毒DNA水平是判断乙型肝炎病毒在体内是否复制，患者传染性高低及选择治疗方案的重要指标。目前临床一般采用实时荧光定量PCR技术对乙型肝炎病毒DNA拷贝数进行定量检测。实时荧光定量PCR技术融汇了PCR技术的高效扩增，探针技术的高特异性，光谱技术的高敏感性等优点，通过直接检测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量的结果。但此技术可能与标本状态密切相关，如溶血、脂血等。有研究表明Hb及其代谢产物可能与Taq酶相互作用，进而抑制Taq酶的活性，使PCR扩增效率明显降低，导致定量测定结果偏低[1]。在临床检验标本中，溶血标本较为常见，究竟溶血到何种程度会对乙型肝炎病毒DNA定量结果产生影响？本文将探讨不同程度溶血对乙型肝炎病毒DNA定量检测的影响。
对象与方法
1.对象 我们收集了ALT>40 U/L、HBsAg阳性、HBeAg阳性、HBcAb阳性的乙型肝炎患者30例,其中男性17例，女性13例，年龄在18～53岁之间。
2.试剂 深圳匹基公司提供的乙型肝炎病毒DNA检测试剂盒(批号：20070501)、乙型肝炎病毒DNA阳性标准品。
3.仪器 BECKMAN全自动血球计数仪(型号：Coulter Ac.Tdiffe)、Lightcycle荧光PCR扩增仪(罗氏公司)、高速低温离心机(Sigma公司)、干式恒温器(杭州蓝焰科技有限公司)、低温冰箱(SANYO公司)。
4. 方法
(1)模拟溶血标本的制备：抽取30例乙型肝炎患者血液后，2小时内离心分离血清，这种不含Hb的血清作为无Hb对照组，然后取每位患者600 μl血清及适量红细胞混合，置于-20℃冰箱保存备用。次日将含红细胞的血清管取出放于室温解冻 ......
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