3，6-二羟黄酮对HL-60细胞生长增殖的影响(2)
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6.荧光染色 参照文献[4]，略有改动。收集对数生长期的细胞，PBS洗3次，调整细胞浓度2.0~3.0×105/ml，加入6孔板中，加入不同浓度的药物，并设空白对照组，处理一定时间后，收集细胞，加入荧光染料Hoechst 33258和PI，至其终浓度分别为10 μg/ml和20 μg/ml，37℃避光染色30 min，紫外光激发，荧光显微镜下观察细胞核的形态及颜色改变以区分出正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞，并拍照。
7.琼脂糖凝胶电泳分析DNA片段化 参照文献[5]，略有改动。收集107细胞，PBS洗涤离心沉淀细胞，用50μl裂解液(1%NP-40、20 mmol/L EDTA、50 mmol/L TrisHClpH=7.5)处理细胞10 s，1 500 g离心5 min，收集上清液，再用50 μl裂解液重复处理1次，合并上清液，加10%SDS，2 μl 10 mg/ml RNase A，混匀，37℃水浴2 h，加入4 μl 20 mg/ml 蛋白酶 K于56℃处理2 h，加入70 μl 10 mmol/L NH4Ac，600 μl无水乙醇沉淀DNA， 4℃，15 000 g，离心15 min，真空干燥，TE Buffer溶解DNA，进行1.5%琼脂糖凝胶电泳(恒压)，观察并拍照。
8.统计学处理 计量资料以-±s表示，采用SPSS 11.0进行单因素方差分析，P<0.05为有统计学差异。
结果
1.台盼蓝拒染法检测药物的细胞毒性作用 不同浓度的3，6-二羟黄酮分别作用于人早幼粒白血病细胞株HL-60不同时间，用台盼蓝拒染法观察它的增殖抑制效果。结果表明(见表1)：当时间不变时，随着3，6-二羟黄酮剂量的增大，对HL-60细胞株抑制作用增强，且呈剂量依赖性；在同一药物浓度情况下，随着药物作用时间的延长，药物对细胞株增殖的抑制作用也有所增强，呈时间依赖性。当0~160 μmol/L的3，6-二羟黄酮分别处理细胞12 h、24 h和36 h，计算其半抑制浓度IC50值分别为166.79 μmol/L、59 ......
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