全硫代反义寡核苷酸抑制人膀胱癌Ej细胞活性的实验研究(2)
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(4)端粒酶活性检测 取处理因素作用24 h、48 h、72 h后的细胞104个，PBS洗涤后离心去上清，加裂解液10 μl，冰浴放置30 min，4℃、15000 rpm 离心10 min，取上清液保存于-80℃，以备端粒酶活性检测。按试剂盒说明书操作，检测每组在450 nm处的OD值，并计算相应的端粒酶活性。Index=样品的OD值/ 标准液的OD值。结果判断:Index≥1为+；Index在0.91～0.99为+/-；Index≤0.90为-。
(5)流式细胞仪检测 取处理因素作用24 h、48 h、72 h后的细胞106个，70%酒精固定24 h，冷PBS洗涤3次，15000 rpm离心10 min，弃上清，碘化丙啶避光染色30 min，上机测试细胞凋亡。
3.统计学处理 计量资料以-±s表示，用SPSS 11.5软件包处理，组间比较采用单因素方差分析及q检验。
结果
1.MTT检测结果 5 μmol/L，3 μmol/L及1 μmol/L的PSASODN 转染Ej细胞后24 h，对细胞增殖无明显抑制，与对照组比较(P>0.05)；48 h能够抑制细胞增殖，与对照组比较(P<0.05)，并呈剂量依赖关系；72 h与对照组比较能够显著抑制细胞的增殖 (P<0.01)，并呈剂量依赖关系。表明对Ej细胞活性的影响在48 h左右开始起作用，呈剂量和时间依赖性(表1)。
2.PSASODN对膀胱癌细胞Ej端粒酶活性的影响 作用24 h、48 h的各组细胞端粒酶活性均为阳性。72 h检测结果表明：5 μmol/L的SODN转染的Ej细胞端粒酶仍表现为阳性；ASODN转染Ej细胞后，端粒酶活性显著降低，呈剂量依赖性(表2)。
讨论
端粒酶是控制肿瘤细胞增生及凋亡的重要调控物质之一[1] ......
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