羧甲基茯苓多糖的制备及抗肿瘤药效学研究(2)
 |
3.统计学处理 计量资料以-±s表示，组间比较采用t检验，以P<0.05为有统计学差异。
结果
1.体内抗肿瘤作用 实验结果表明，CMP30～360 mg/kg剂量腹腔注射，对ICR/JCL品系的小鼠肿瘤U14 有较强的抑制作用，对比实验发现CMP最优注射剂量为180 mg/kg。见表1。
2.体外抗肿瘤作用 体外实验研究表明，0.2～10μg/ml浓度的CMP对小鼠H22肝癌细胞的生长有较显著抑制作用，其中以CMP 2.0 μg/ml为最优浓度。见表2。
讨论
1.羧甲基茯苓多糖的制备
羧甲基茯苓多糖的制备方法主要有水媒法和溶媒法两种[4]。水媒法是把初步制得的茯苓多糖用稀碱溶液溶解，再加入一定量的卤代酸水溶液，适当温度下进行醚化反应；溶媒法则是把茯苓多糖悬浮在有机溶剂(如二甲苯、氯仿、乙醇等)中，碱化一段时间，再加入卤代酸，在适当温度下进行醚化反应，使卤代酸中-CH2COOH结构取代多糖分子上的OH中的H，取代程度越高，羧甲基茯苓多糖收率也越高。第一种方法加酸中和后，多糖在介质中呈黏稠的凝胨状，分离难度很大，使CMP分离产率显著降低；第二种方法有机溶剂消耗量大，成本高。本研究选用自制茯苓粉在异丙醇溶剂中高效合成羧甲基茯苓多糖，并通过工艺优化试验，使其消耗水和有机溶剂尽可能少，反应操作简便，羧甲基取代度高，产品水溶性好，临床应用效果显著。
, http://www.100md.com
2.抗肿瘤实验
癌症为世界医学极为关注的难题，世界各国均高度重视，各种治疗、预防措施正加紧研究。茯苓具有特有的药理、药化作用，其抗肿瘤效应亦日趋引起人们的重视。由于茯苓多糖分子中主要为β-1→6葡萄糖结构，糖链上分布有少量的β-1→6结构的葡萄糖侧链。未经化学改造的茯苓多糖对肿瘤的抑制率仅为 0～3%。本实验采用化学修饰方法将茯苓多糖中的β-1→6侧链切断，经过适度水解得到线型的β-1→3茯苓次多糖，在卤代酸存在下将其羧甲基化，即可得到有较高抗肿瘤活性的羧甲基茯苓多糖。
体内实验结果表明，CMP 30～360 mg/kg剂量腹腔注射，对ICR/JCL品系的小鼠肿瘤U14有较强的抑制作用，当注射剂量为30 mg/kg时，抑瘤率为68.7%，随着剂量的增大，抑瘤率逐渐升高，当注射剂量为60 mg/kg时，抑瘤率升至77.2%，而注射剂量升至180 mg/kg时，抑瘤率可高达92.2%。
, 百拇医药 但注射剂量再进一步升高对提高抑瘤率并无帮助，相反，随着注射剂量加大，抑瘤率有一定程度降低，如当注射剂量为360 mg/kg时，抑瘤率反倒下降为89.1%。因此，本抑瘤实验中，CMP最优注射剂量应为180 mg/kg。
体外实验研究表明，0.2～10 μg/ml浓度的CMP对小鼠H22肝癌细胞的生长有较显著抑制作用。如当CMP浓度为0.4 μg/ml时，12小时和24小时OD值分别为0.8212±0.081 和1.473±0.081，较对照组显著降低(P均<0.01)，CMP 2.0 μg/ml为最优浓度，浓度更高将导致OD值进一步升高。
参考文献
[1]尚志钧.新修本草[M].合肥: 安徽科技出版社,1981.
[2]黄才欢,李 炎,王秀芬. 茯苓多糖的提取及其结构表征[J].广州食品工业科技，2001，17(3)：13-15.
[3]谈新提,王艺峰，张俐娜，等.化学修饰的茯苓多糖抗肿瘤效应的组织学观察[J].武汉大学学报(医学版)，2004，25(6)：652-656.
[4]陈春霞.羧甲基茯苓多糖的化学研究[J].中国食用菌，1994，13(5)：35-36..
(收稿日期：2008-05-26 修回日期：2008-07-22)
(编辑：梁明佩 英文审校：钟京梓), http://www.100md.com(程金生 赵 进 黄 徽)