TP-ELISA一步法在检测梅毒螺旋体抗体中的钩状效应分析(2)
在本研究中,通过采用TPELISA双抗原夹心一步法、二步法及TPPA检测10份可疑标本,结果表明,用双抗原夹心一步法检测为阴性的这10份标本,用二步法检测均转为阳性,TPPA检测结果也均为阳性,而且滴度均达到1∶1280以上;将10份标本再进行倍比稀释并同时用双抗原夹心一步法和二步法同时进行检测,稀释度在1∶2和1∶4时,一步法检分别有4例和2例检测结果仍为阴性,其余稀释度血清用双抗原夹心一步法和二步法检测,结果均为阳性,这说明了双抗原夹心一步法对高浓度抗体标本的检测是存在钩状效应的,而将存在钩状效应的标本经过稀释后可以消除,但是稀释的倍数要达到一定程度。通过对10份标本进行倍比稀释度后,用双抗原夹心一步法和二步法检测,用各浓度血清吸光度值(A)的均值与血清稀释度关系所做的曲线可看出,一步法在原倍及低稀释倍数也就是标本中待测抗体浓度较高时,吸光度值低;随着稀释倍数的增加吸光度值反而逐渐增高,到最适比时达到最高值,而后又逐渐降低,吸光度(A)值变化曲线呈“钟形”。而用二步法检测,吸光度(A)一直维持在较高水平,而当稀释度达一定倍数时,吸光度(A)值才逐渐下降,整个曲线呈倒的“S”形,这与蒋玉莲,朱浩稳等的报道相似[3]。
, 百拇医药
双抗原夹心二步法由于是抗体和酶标抗原分两步加入,因此不存在竞争抑制作用,可以避免钩状效应的产生。在本研究中,我们利用一步法试剂,先加入血清标本,37℃孵育30分钟,洗板后再加入酶标抗原,这样建立起来的二步法测定经一步法检测结果为阴性,而TPPA法检测为阳性的标本,其结果全部转为阳性,这说明了双抗原夹心二步法可以避免钩状效应的产生。虽然二步法可以避免钩状效应的产生,但却造成实验的敏感性降低[4],一些弱阳性标本会被漏检。
虽然双抗原夹心一步法在方法学上存在“钩状效应”的缺陷,但是由于其快速简便节约时间的优势,在我国仍然占据着很大的市场。为避免和消除钩状效应,我们可以用二步法、稀释法及TPPA或RPR 等方法做为补充,对临床一些可疑标本进行测定[5]。同时对于试剂厂家,应在固相和标记抗体或抗原的选择匹配上,采取结合位点远离或含多个可结合位点的方法,这样在很大程度上,可以避免或减轻“钩状效应”;另外也可充分混匀反应液,适当延长反应温育时间,则可使A、C和D复合物减少至最低程度,而减轻“钩状效应”的产生。
, 百拇医药
总之,本研究结果表明,TPELISA一步法检测梅毒特异性抗体存在钩状效应,在出现检测结果和患者病史及临床病表变现不一致的情况下,应该选择其他方法进行确认。
参考文献
[1]韦莹慧.早期梅毒实验室检查的现状[J].右江医学,2008,36(4):483-485.
[2]陈华根,刘 冰.规范使用“带现象”和“钩状效应”概念[J].中国输血杂志,2006,19(3):218.
[3]蒋玉莲,朱浩稳,赖 源,等. 酶联免疫吸附试验显色与样本含量的关系[J].现代检验医学杂志,2008,23(1):123.
[4]张京球,谭爱国,郭 健.TPELISA一步法检测梅毒螺旋体抗体钩状现象研究[J].中国实验诊断学,2007,11(11):1520.
[5]李金明.感染性疾病血清学检验中应重视对弱反应性标本的确认[J].中华检验医学杂志, 2006,29(7):577.
(收稿日期:2009-05-01 修回日期:2009-07-31)
(编辑:梁明佩), 百拇医药(尹 琦 徐玉婵)
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双抗原夹心二步法由于是抗体和酶标抗原分两步加入,因此不存在竞争抑制作用,可以避免钩状效应的产生。在本研究中,我们利用一步法试剂,先加入血清标本,37℃孵育30分钟,洗板后再加入酶标抗原,这样建立起来的二步法测定经一步法检测结果为阴性,而TPPA法检测为阳性的标本,其结果全部转为阳性,这说明了双抗原夹心二步法可以避免钩状效应的产生。虽然二步法可以避免钩状效应的产生,但却造成实验的敏感性降低[4],一些弱阳性标本会被漏检。
虽然双抗原夹心一步法在方法学上存在“钩状效应”的缺陷,但是由于其快速简便节约时间的优势,在我国仍然占据着很大的市场。为避免和消除钩状效应,我们可以用二步法、稀释法及TPPA或RPR 等方法做为补充,对临床一些可疑标本进行测定[5]。同时对于试剂厂家,应在固相和标记抗体或抗原的选择匹配上,采取结合位点远离或含多个可结合位点的方法,这样在很大程度上,可以避免或减轻“钩状效应”;另外也可充分混匀反应液,适当延长反应温育时间,则可使A、C和D复合物减少至最低程度,而减轻“钩状效应”的产生。
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总之,本研究结果表明,TPELISA一步法检测梅毒特异性抗体存在钩状效应,在出现检测结果和患者病史及临床病表变现不一致的情况下,应该选择其他方法进行确认。
参考文献
[1]韦莹慧.早期梅毒实验室检查的现状[J].右江医学,2008,36(4):483-485.
[2]陈华根,刘 冰.规范使用“带现象”和“钩状效应”概念[J].中国输血杂志,2006,19(3):218.
[3]蒋玉莲,朱浩稳,赖 源,等. 酶联免疫吸附试验显色与样本含量的关系[J].现代检验医学杂志,2008,23(1):123.
[4]张京球,谭爱国,郭 健.TPELISA一步法检测梅毒螺旋体抗体钩状现象研究[J].中国实验诊断学,2007,11(11):1520.
[5]李金明.感染性疾病血清学检验中应重视对弱反应性标本的确认[J].中华检验医学杂志, 2006,29(7):577.
(收稿日期:2009-05-01 修回日期:2009-07-31)
(编辑:梁明佩), 百拇医药(尹 琦 徐玉婵)