1.2细胞与细胞培养

    胃腺癌细胞株(包括高分化癌细胞株MKN28和低分化癌细胞株MKN45)和非肿瘤胃黏膜细胞株GES1均购自中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库，细胞培养于含10%胎牛血清和1%青链素的DMEM培养基中，于37℃、5%CO2的条件下培养。

    1.3POLD3表达载体的构建

    采用PCR技术结合双酶切技术以pcDNA3.0为载体构建POLD3表达载体，具体方法参见我们以前的报道[6]。

    1.4POLD3蛋白表达水平的检测采用免疫组化SABC法检测GA肿瘤组织及肿瘤旁组织中的POLD3蛋白表达水平，表达水平通过阳性细胞数与强度的乘积(即IRS评分法)确定，更为详细的方法与评分参见我们以前的报道[7]。在当前研究，为便于分析，我们定义IRS≤3分为低POLD3表达，>3分为高POLD3表达。POLD3蛋白在细胞株中的表达则通过蛋白印迹法进行检测，具体方法参见我们以前的报道[8] ......