瞬时受体电位阳离子通道蛋白6高表达对转化生长因子—β1诱导体外培养小鼠肾足细胞损伤的作用(2)
去除24孔板中的培养液，每孔细胞中加入50 μL IP(IP使用前与PMSF混匀，使PMSF终浓度为1 mmol/L)充分裂解细胞，用枪头上下吹打细胞10～20次后收集细胞至1.5 ml离心管中，14 000 g离心5 min，取上清液至200 μL离心管中得细胞总蛋白质，用BCA蛋白定量试剂盒测定总蛋白浓度。将提取的总蛋白溶于5%SDS，100℃，5分钟热变性。每孔加50 μg总蛋白进行SDSPAGE凝胶电泳，300 mA恒流转至PVDF膜2.5 h。3%BSA室温封闭1小时，加入按适当比例稀释的一抗(兔抗TRPC6多克隆抗体，稀释度1∶300；兔抗caspase9，稀释度1∶300；兔抗nephrin，稀释度1∶200；兔抗desmin ......
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