1.2.3 基因分型

    本实验PCR反应体系共20 μL，包括：1.0 μL模板DNA、2.0 μL缓冲液、2.0 μL dNTPs、1U TapDNA聚合酶及上、下游引物各1.0 μL，剩余体积用灭菌的双蒸水添加至20 μL。PCR反应程序：95℃ 2 min，94℃ 20 s，65℃ 40 s，72℃ 1.5 min，循环35次。72℃平衡2 min。PCR产物经SAP酶和核酸外切酶I(EXO1)纯化后进行延伸反应。延伸反应体系共10 μL，含5 μL SNaPshot Multiplex Kit(ABI)，2 μL纯化PCR产物，1 μL延伸引物混合物，2 μL超纯水。延伸反应程序：96℃ 1 min，96℃ 10 s，55℃ 5 s，60℃ 30 s，循环28次。延伸产物经SAP酶纯化在ABI3730XL仪器检测，结果用GeneMapper 4.1作分析。采用DNA测序法验证上述分型结果。

    1.3 统计学方法

    用SPSS 17.0统计学软件作数据分析 ......