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编号:13409510
石斛多糖对SHR氧化应激反应和晚期糖基化终产物代谢的影响(2)
http://www.100md.com 2019年9月1日 《右江医学》 2019年第9期
     1.3 标本采集

    于干预后麻醉SHR进行标本采集。(1)麻醉方法:碘伏消毒,以10%水合氯醛3 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠。(2)血液标本采集:剃去腹部的毛,解剖,切腹壁打开腹腔,从腹腔静脉取血0.5 mL,低温分离取血清。(3)标本采集:剪取腹主动脉平滑肌15 mm×3 mm组织,剪成5 mm×3 mm共3小块,分别置于3个冻存管,于30 min内液氮固定4 h,移至-70℃冰箱保存备检。

    1.4 标本检测

    SOD活性用黄嘌呤氧化酶法测定,CAT用钼酸铵法测定,MDA用硫代巴比妥酸法测定,sRAGE用ELISA法测定,试剂盒由杭州沃森生物技术有限公司提供,用美国BIO RAD 550型酶标仪检测,严格按检测方法和程序进行。

    1.5 RAGE mRNA表达检测

    用RT-PCR法,取100 μL腹肌匀浆,用Trizol试剂提取总RNA,氯仿和异丙醇抽提。紫外分光光度仪和琼脂糖电泳鉴定RNA的浓度和纯度,取10 μL,逆转录合成cDNA,-70℃冻存备用。取5 μL逆转录产物进行PCR扩增反应,并以β-actin为内参对照。根据Gene Bank人RAGE基因(Gene Bank登录号AB036432)设计RAGE基因引物 ......
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