1.2 纳入和排除标准

    纳入标准：目前对结肠癌的诊断标准国内外还未有统一的明确规定，本研究主要根据大便隐血试验、肠镜及病理学检查、相关肿瘤指标、影像学(消化道造影、CT、MRI等)以及其他相关检查，若检查结果之间存在相互矛盾，则以肠镜病理结果为标准。排除标准：①临床病例资料或随访资料不完整;②患者于围手术期已死亡;③患者为肿瘤复发或者并发其他恶性肿瘤;④患者有重要脏器(心、肝、脾、肾等)功能障碍。

    1.3 实验试剂

    兔抗人Calpain-9和K-ras多克隆抗体皆采购于美国Abgent公司;免疫组织化学实验和免疫印迹实验的其他试剂皆采购于上海百信生物科技公司。

    1.4 免疫组织化学法检测结肠癌及配对癌旁组织中Calpain-9阳性细胞面积

    ①选取患者的肿瘤组织和配对癌旁组织，大小约0.5 cm×0.5 cm;②常规方法固定、包埋、切片;③依次进行脱蜡、抗原修复;④加入一抗(兔抗人Calpain-9或K-ras多克隆抗体) 0.05 mL (1∶300)，37℃恒温孵育1 h或4℃恒温过夜;⑤加入二抗0.5 mL (辣根过氧化物酶标记) ......