miR-155调控线粒体自噬对足细胞损伤的机制研究(3)
1.3.3 Western blot细胞裂解后提取总蛋白，采用BCA法测定蛋白浓度后配平，5×Loading buffer混匀，沸水浴5 min;每条泳道上样50 μg蛋白，SDS-PAGE电泳，切胶，湿法转膜后，5%脱脂奶粉浸泡，室温放置约1 h。加入1∶3000稀释后的一抗于4℃孵育过夜，1×TBST清洗3次，每次10 min;然后用1∶3000稀释的二抗于37℃孵育1 h，1×TBST清洗3次，每次15 min;显色曝光后进行底片扫描，统计分析蛋白灰度值。
1.3.4 CCK8检测细胞活性
以2×103/孔的浓度将细胞接种于96孔板，每组设置5个副孔。按照EnoGeneCellTM Counting Kit-8(CCK-8)细胞活力检测试剂盒说明书操作，每孔加入100 μL CCK8与DMEM-F12以1∶10配制的工作液，96孔板在培养箱中避光孵育4 h后 ......
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