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编号:13832021
自噬相关蛋白ULK1在糖尿病大鼠溃疡创面组织中的变化(2)
http://www.100md.com 2020年7月1日 《右江医学》 202007
     1 材料与方法1.1 实验动物 SPF级Wistar雄性大鼠18只,3月龄,体重230~260 g,由长沙市天勤生物技术有限公司提供。该实验经右江民族医学院动物伦理委员会批准。

    1.2 主要试剂 链脲佐菌素(Streptozocin,STZ):北京华越洋生物科技有限公司生产;水合氯醛:成都市科龙化工试剂厂生产;ULK1-Antibody、p-ULK1(phospho S758)-Antibody:Abcam公司生产;山羊抗兔Ig、β-actin抗体:北京中杉金桥生物技术有限公司生产;ULK1、β-actin引物:上海捷瑞生物工程有限公司合成。

    1.3 方法

    1.3.1 实验动物分组及糖尿病创面模型的建立 大鼠予适应性喂养1周后随机分为对照组、模型组,每组9只。对照组大鼠在背部行约2.5 cm×2.5 cm面积大小全层皮肤切除;模型组予高脂饮食4周,禁食16小时后腹腔注射STZ,1周后大鼠出现多饮、多尿、体重减少等糖尿病症状且空腹血糖≥16.7 mmol/L为糖尿病大鼠模型建立成功。糖尿病大鼠造模成功后作全层皮肤切除,即完成糖尿病创面大鼠模型的建立[2]。

    1.3.2 标本采集与处理 各组于创面模型建立后第1天、第11天、第18天共3个时间点各随机取3只大鼠,腹腔注射麻醉,采集造模区创面组织后将大鼠处死。将采集到的样本之一用10%福尔马林固定制作HE染色切片,其余样本置于-80℃冰箱保存,待行qRT-PCR和Western blotting检测 ......
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