NR2C2介导的长链非编码RNA LINC00675靶向miR-665调控肝癌细胞生物学行为的机制研究
汪建初,李曙波,陆礼柏,陈益晨,马嘉盛,罗宗将,路远,浦涧【摘要】 目的 探討研究长链非编码RNA LINC00675对肝癌细胞生物学行为的影响及其分子机制。
方法 通过qRT-PCR检测LINC00675在肝癌组织以及细胞中表达量,并检测LINC00675在肝癌细胞HepG3与Huh7细胞质及细胞核中的表达分布。通过在HepG3与Huh7中稳定转染慢病毒过表达LINC00675建立细胞模型。通过CCK-8与流式细胞学检测LINC00675对肝癌细胞增殖、凋亡行为的影响,并通过检测细胞模型中葡萄糖摄取量以及乳酸产量变化监测细胞Warburg效应的变化,运用带有AGO2抗体的RNA免疫沉淀技术评估LINC00675与mRNA的潜在结合能力。使用LncBase Predicted v.2 DIANA工具预测LINC00675下游mRNA靶基因。运用RNA pull-down技术检测LINC00675与miR-665结合的可能性。运用荧光素酶实验验证LINC00675与miR-665的靶向结合,共转染实验验证miR-665介导了LINC00675对肝癌生物学行为的影响。通过使用JASPAR数据库预测LINC00675上游调控基因。通过构建NR2C2过表达以及敲低细胞模型,并使用qRT-PCR实验检测细胞模型中的LINC00675表达量的变化 ......
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