唐志明 林栩 梁钊 王晨 韦美理 王蓉 吴昱升 黄慕源

    【摘要】目的利用慢病毒載体构建稳定过表达miR-155的AB 8/13细胞株(AB 8/13-LV-has-miR-155)和稳定敲低miR-155的AB 8/13细胞株(AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton)，为研究miR-155在足细胞焦亡和肾脏疾病中的作用奠定基础。方法体外培养AB 8/13细胞，使用不同浓度嘌呤霉素刺激AB 8/13细胞48 h，在光学显微镜下观察AB 8/13细胞的死亡情况;使用LV-has-miR-155阴性对照病毒、LV-has-miR-155-5p inhibiton阴性对照病毒分别感染AB 8/13细胞，在荧光显微镜下观察AB 8/13细胞的状态和感染效率;在嘌呤霉素筛选出稳定细胞株后，通过实时荧光定量PCR法检测稳定细胞株的miR-155表达量。结果在3.5 μg/mL及以上浓度的嘌呤霉素作用于AB 8/13细胞48 h后，所有细胞全部死亡。LV-has-miR-155慢病毒感染AB 8/13细胞的感染效率达到80%的最佳条件为在含HiTransG P的完全培养基中进行感染，MOI为10;LV-has-miR-155-5p inhibiton慢病毒感染AB 8/13细胞的感染效率达到80%的最佳条件为在含HiTransG A的完全培养基中进行感染，MOI为100。qRT-PCR结果显示AB 8/13-LV-has-miR-155细胞株的miR-155表达量明显升高，AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton细胞株的miR-155表达量降低。结论成功构建AB 8/13-LV-has-miR-155稳定细胞株和AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton稳定细胞株，为进一步探究miR-155在人足细胞焦亡中的作用机制奠定基础 ......