唐秀文

    【关键词】肺炎;耶氏肺孢子菌;聚合酶链式反应;宏基因组二代测序技术

    中图分类号：R563.1+1 文献标志码：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.06.015

    耶氏肺孢子菌肺炎(PJP)是一种由耶氏肺孢子菌(PJ)引起的呼吸系統机会性感染，常见于免疫功能低下或缺陷者。近年来，接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)和肺孢子菌肺炎预防措施的HIV感染患者发生PJP的概率明显减少，但随着癌症患者、器官移植者、老年患者、先天性或获得性免疫缺陷及因其他疾病而接受免疫抑制剂等肺孢子菌肺炎高危人群的扩大，临床肺孢子菌肺炎患者日趋增多，年病死率达30%～50%[1～2]。PJP患者的临床症状、体征、X线胸片及常规实验室检查均无特异性，易漏诊和误诊。目前耶氏肺孢子菌缺乏稳定、可靠的体外培养系统，无法从培养方法获得;血清β-D-葡聚糖(BDG)检测敏感度高，但缺乏特异性[3～4];只能作为辅助诊断指标。目前诊断PJP的检查“金标准”仍然是下呼吸道标本通过染色镜检发现特征性包囊和滋养体，推荐的GMS染色对包囊染色特异性好，对比性强，菌体容易辨认，故在临床得到广泛应用，但受限于标本质量、肺孢子菌的载量、检验师的从业经验以及耶氏肺孢子菌的形态多形性，检出率较低，因此孢子菌肺炎的早期诊断比较困难。科学家们用分子生物学方法探求PJP的病原体，使用分子生物学方法检测耶氏肺孢子菌采用的基因序列有：肺孢子菌线粒体大亚基核糖体核糖核酸(mitochondrial partial LSU rRNA gene，mtLSU rRNA)、内源转录间隔区序列(internally transcribed spacer，ITS)、主要表面糖蛋白(the major surface glycoproteins，MSG)及二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase，DHFR)等。本文主要综述不同分子生物学诊断方法检测耶氏肺孢子菌的研究进展。

    1耶氏肺孢子菌分子生物学检测方法

    1.1普通聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)聚合酶链式反应是美国科学家Kary Mullis在20世纪80年代发明的一种用于扩增特定DNA片段的分子生物学技术，并以此获得诺贝尔化学奖。国外在1990年首次报道应用PCR技术从宿主肺泡灌洗液(BALF)中检出PJ-DNA，2006年，将PCR与免疫荧光法(IFA)两种方法对比，结果显示PCR方法敏感性更好。而GMS染色镜检法与PCR两种方法相比则PCR的敏感性更高 ......