康红丽,潘秀虹,崔久明,尤燕舞

    (1.右江民族医学院研究生学院,广西百色533000;2.广西医学科学院·广西壮族自治区人民医院肾内科,广西南宁530000)

    系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是具有临床异质性的复杂的累及多个系统和器官的自身免疫性疾病。狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)是系统性红斑狼疮累及肾脏所致的最常见的并发症之一,也是影响患者预后的一个最主要因素[1]。目前对于SLE的常规治疗方法包括使用糖皮质激素和/或免疫抑制剂治疗,虽可以部分缓解病情,但毒副作用大,且重症患者可能会出现严重的脏器损伤[2-3]。因此,还需要我们进一步探索LN的药物治疗。

    研究发现Toll 样受体4/髓系分化因子88/核转录因子κB(Toll-like Receptor 4/myeloid differentiation factor 88/nuclear factor-kappa B, TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路与 LN 的肾小球损伤密切相关[4]。雷帕霉素(rapamycin, RAPA)作为大环内酯类免疫抑制剂可用于预防肾移植术后的急性排斥反应[5],但是基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究RAPA对LN的治疗作用还少有报道。本研究选用经典狼疮模型MRL/lpr小鼠,通过分析雷帕霉素对MRL/lpr小鼠蛋白尿水平、自身抗体水平、肾组织病理变化、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路蛋白和基因的表达水平及肾组织细胞凋亡等的作用,试图阐明雷帕霉素对LN的作用机制和作用靶点,为狼疮性肾炎的治疗提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物C57BL/6小鼠和MRL/lpr小鼠各20只,购买于上海斯莱克实验动物有限公司,实验动物合格证号2017000504481。饲养于右江民族医学院实验动物中心(NO.SYXK 2017-0004)SPF级动物房。

    1.1.2 主要仪器Thermo scientific GeminiAS全自动染色机、自动化封片机 ClearVueTM、3DHistech Pannoramic Midi扫描仪、OLYMPUS显微镜、OLYMPUS激光共聚焦显微镜。

    1.1.3 主要试剂RAPA、HE、Masson、PAS、PASM染色试剂盒、Trizol试剂(北京索莱宝科技有限公司);BCA蛋白定量试剂盒(南京建成生物工程研究所);ELISA试剂盒(武汉华美生物工程有限公司);qRT-PCR及cDNA合成试剂盒(莫纳生物科技有限公司),Anti-TLR4 Ab、MyD88Ab、phospho-NF-κB-p65Ab(江苏亲科生物研究中心有限公司),TUNEL原位细胞凋亡检测盒(江苏凯基生物技术股份有限公司) ......