乳香等12种中药提取物的急性毒性试验研究
【摘要】目的:探讨乳香等12种中药提取物的急性经口毒性。方法 根据霍恩氏法，共分21.5g/kg BW、10.0g/kg BW、4.64g/kg BW和2.15g/kg BW四个剂量组和一个空白对照组，采用经口染毒途径进行试验。结果在给予乳香等12种中药提取物染毒后，动物陆续出现了不同程度的腹泻症状且以最高剂量组最为严重。乳香8种等中药提取物的增重均明显低于对照组(P< 0.05)，但皂角刺和茯神的增重却明显高于对照组(P< 0.05)。另外，凌霄花、淡竹叶提取物高剂量组的增重均明显低于低剂量组(P< 0.05)。至试验结束，最高剂量组有不同程度的动物死亡。结论 乳香等12种中药提取物的半数致死量(LD50)均大于21.5g/kg BW，属于无毒级。
【关键词】乳香；急性毒性；半数致死量
【中图分类号】R222.16【文献标识码】A【文章编号】1044-5511(2011)10-0081-02
, 百拇医药
【基金项目】 浙江省课题(2009F70028)
我国是一个中药提取物的生产大国。中药提取物被广泛用于药品、保健品、化妆品等多个领域，发挥着越来越大的不可替代的作用。但是，我国对于中药提取物的毒理研究还不是很多，针对中药提取物的急性毒性研究则更加少见，很多中药提取物的LD50值根本无据可查，这给相应的毒理学评价带来了很大的麻烦。笔者结合工作实际，对近期完成的乳香等12种中药提取物急性毒性试验研究进行了汇总，供同行们参考并为进一步的深入研究提供初步的安全性评价资料。
1 材料和方法
1.1实验动物
所有动物购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。动物生产许可证号：SCXK(沪) 2007-0005。动物按照SPF环境饲养。动物自由摄食和饮水。每种中药提取物均使用40只ICR小鼠，体重18-22g，雌雄各半。正式试验开始前将动物随机分为四个剂量组，每组10只，雌、雄各半并先在本实验室适应环境5天。
, 百拇医药
1.2 样品
1.2.1 样品来源和描述：所有中药提取物均来自于宁波立华制药有限公司。一共
检测了12种中药提取物，分别是乳香、凌霄花、玫瑰花、葛根、旋覆花、垂盘草、石斛、百部、皂角刺、淡竹叶、茯神、钩藤的水提取物。所有样品均为粉末状固体。
1.2.2 样品处理：分别取10.75g、10g 、4.64g和2.15g样品，用蒸馏水分别稀释至20ml、20ml、20ml和20ml制成混悬液。以0.4ml/20g体重灌胃量进行染毒，对应染毒剂量分别为10.75g/kgBW、10g/kgBW、4.64g/kgBW、2.15g/kgBW。
1.3 主要仪器
德国产Sartorius—CP8201电子天平(d=0.1g)，德国产梅特勒托利多AB104-S(d=0.1mg)
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1.4 试验方法
根据《保健食品安全性毒理学评价程序和方法》[1]并参照《食品安全性毒理学评价程序和方法》[2]，采用霍恩氏法进行试验。
1.4.1染毒途径、剂量和灌胃体积：采用经口染毒途径。根据预试验结果，共设21.5g/kg BW、10.0g/kg BW、4.64g/kg BW和2.15g/kg BW四个剂量组和一个空白对照组，其中21.5g/kg BW剂量组的动物需要用10.75g/kgBW的样品以0.4ml/20g体重灌胃量分2次染毒(间隔4h)，另三剂量组均以0.4ml/20g体重灌胃量一次灌胃染毒。
1.4.2染毒前将小鼠禁食16h，不限制饮水。染毒后连续观察14d，主要观察小鼠的精神状态、活动、饮食、毛发、大小便、气胀、腹泻、便秘、口鼻有无异常分泌物等情况并记录出现中毒症状的时间。如果动物有死亡，记录死亡数、死亡时间，对死亡动物解剖观察其心、肝、脾、肺和肾等主要器官的组织变化。在第7d、第14d称量体重并计算14d增重。未死亡小鼠，实验第14d处死，解剖观察其心、肝、脾、肺和肾等主要器官的组织变化。
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1.5统计学方法
所有数据用SPSS16.0统计软件进行录入和统计。各组数据以±s表示，各组均数间差异采用方差分析。
2 结果
2.1 对小鼠一般体征的影响
在给予乳香、凌霄花等中药提取物21.5g/kgBW、10.00g/kgBW、4.64g/kgBW和2.15g/kgBW灌胃后，部分小鼠表现为精神状态不佳，活动减少。随后，小鼠活动正常，初步考虑为灌胃影响所致。不过，染毒后，除葛根、皂角刺和淡竹叶3种中药提取物外，凌霄花、玫瑰花、乳香、旋覆花、垂盘草、石斛、百部、茯神、钩藤等其它9种中药提取物最高剂量组均出现了程度不等的腹泻症状。除死亡动物外，幸存动物的腹泻症状均在36小时内消失。除此之外，连续观察14d，所有幸存小鼠毛色光洁，未出现其它的不良情况。
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2.2 染毒后动物死亡情况及染毒前后的体重变化情况
结果显示，部分中药提取物的高剂量组增重有低剂量组和对照组有显著性差异，具体如下：
凌霄花雄性动物中，高剂量组的增重均明显低于低剂量组和对照组(P< 0.01)；雌性动物中高剂量组的增重明显低于对照组(P< 0.05)。
乳香提取物雄性动物中高剂量组的增重均明显低于低剂量组和对照组(P< 0.01)。
旋覆花雄性动物中10 g/kgBW和4.64 g/kgBW剂量组的增重均明显低于对照组(P< 0.05)；雌性动物中最高剂量组的增重明显低于低剂量组和对照组(P< 0.01)，此外，4.64 g/kgBW的增重明显低于2.15 g/kgBW组(P< 0.05)。
垂盘草提取物雄性动物中各剂量组的增重均明显低于对照组(P< 0.05)。
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石斛提取物雄性动物中各剂量组的增重均明显低于对照组(P< 0.05)且存在剂量-反应关系；雌性动物中10 g/kgBW组的增重明显低于对照组(P< 0.01)。
百部提取物雄性动物中除10 g/kgBW组与对照组间无显著性差异(P>0.05)外，其它各组的增重均明显低于对照组(P< 0.01)。
皂角刺提取物雄性动物中4.64g/kgBW组的增重明显高于对照组(P< 0.05)，；雌性动物中其它各剂量组的增重均明显高于对照组和最高剂量组(P< 0.05)。
淡竹叶提取物雄性动物中其它各组的增重均明显低于低剂量组和对照组(P< 0.01)；雌性动物中除4.64g/kgBW组外，其它各组的增重均明显低于对照组(P< 0.01)，其中，以10g/kgBW组最为明显。
茯神提取物雌性动物中10g/kgBW组和2.15g/kgBW组的增重均明显高于其它剂量组和对照组(P< 0.05)。
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钩藤提取物雄性动物中21.5 g/kgBW组和4.64g/kgBW组的增重均明显低于对照组(P< 0.05)。
此外，玫瑰花、葛根等中药提取物各组间均无显著性差异(P>0.05)。
2.3 对心、肝、胃、脾、肺和肾等脏器的影响
结果显示，凌霄花、葛根、旋覆花、石斛、皂角刺、淡竹叶等6种中药提取物至试验结束，各剂量组动物未见死亡。而玫瑰花、乳香、垂盘草、百部、茯神、钩藤等6种中药提取物都是在最高剂量组见少量动物死亡，解剖结果发现，死亡动物除胃内有大量内容物外，其它器官和组织未见异常。试验结束后，处死所有动物并解剖，两种提取物的小鼠心、肝、胃、脾、肺、肾等主要脏器均未见异常。
2.4 各中药提取物的LD50情况根据各中药提取物各剂量组的小鼠死亡情况可获知各中药提取物的雄性和雌性小鼠经口LD50值均大于21.5 g/kg BW。
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3 讨 论
实验观察发现，在给予中药提取物后，部分小鼠表现为精神状态不佳，活动减少，较安静。除死亡的动物外，其它动物均在染毒后24h内恢复正常。各中药提取物在染毒后，除最高剂量组有少数动物出现轻微的腹泻症状外，其它各剂量组均未观察到明显的腹泻症状。除此之外，连续观察14d，所有幸存小鼠未见动物外观行为变化及中毒症状，动物饮食活动正常，皮毛干净、光滑柔顺，眼、鼻无分泌物，黏膜无充血。呼吸、心跳正常。根据《保健食品安全性毒理学评价程序和方法》中所规定的急性毒性分级情况来看，本研究中，这些中药提取物的雄性和雌性小鼠经口LD50值均大于21.5 g/kgBW，属无毒级别。但是，本研究发现，在大剂量给予这些中药提取物后，动物部分死亡，提示，大剂量给予这些中药提取物后，有一定的毒性。
从解剖情况来看，各中药提取物的动物心、肝、胃、脾、肺、肾等主要脏器均未见异常，提示这些中药提取物的毒性不大。
, http://www.100md.com 不过，从试验前后的体重变化来看，除玫瑰花、葛根两种提取物的体重变化不明显外，其它各中药提取物的体重变化均比较明显。其中，凌霄花、乳香、旋覆花、垂盘草、石斛、百部、淡竹叶、钩藤等中药提取物的增重均明显低于对照组，但皂角刺和茯神的增重却明显高于对照组。另外，凌霄花、淡竹叶提取物高剂量组的增重均明显低于低剂量组。提示大部分中药提取物对体重具有一定的影响。
目前，针对中药提取物的药理和毒理研究还很少，很多数据和资料都不完整，其机制都要有待于深入研究和探讨。本研究也只是在急性毒性方面对上述12种重要提取物进行了试验并探讨了相应的LD50值，希望本研究结果对相关人员会有一定的帮助。
参考文献
[1]卫生部. 保健食品毒理学安全性评价规范.2003：13-25
[2]中华人民共和国国家标准.GB15193.3-2003急性毒性试验.北京：中国标准出版社，2003：17-31, 百拇医药(陈小青 龙再浩 马明 马中春 虞维娜)
【关键词】乳香；急性毒性；半数致死量
【中图分类号】R222.16【文献标识码】A【文章编号】1044-5511(2011)10-0081-02
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【基金项目】 浙江省课题(2009F70028)
我国是一个中药提取物的生产大国。中药提取物被广泛用于药品、保健品、化妆品等多个领域，发挥着越来越大的不可替代的作用。但是，我国对于中药提取物的毒理研究还不是很多，针对中药提取物的急性毒性研究则更加少见，很多中药提取物的LD50值根本无据可查，这给相应的毒理学评价带来了很大的麻烦。笔者结合工作实际，对近期完成的乳香等12种中药提取物急性毒性试验研究进行了汇总，供同行们参考并为进一步的深入研究提供初步的安全性评价资料。
1 材料和方法
1.1实验动物
所有动物购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。动物生产许可证号：SCXK(沪) 2007-0005。动物按照SPF环境饲养。动物自由摄食和饮水。每种中药提取物均使用40只ICR小鼠，体重18-22g，雌雄各半。正式试验开始前将动物随机分为四个剂量组，每组10只，雌、雄各半并先在本实验室适应环境5天。
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1.2 样品
1.2.1 样品来源和描述：所有中药提取物均来自于宁波立华制药有限公司。一共
检测了12种中药提取物，分别是乳香、凌霄花、玫瑰花、葛根、旋覆花、垂盘草、石斛、百部、皂角刺、淡竹叶、茯神、钩藤的水提取物。所有样品均为粉末状固体。
1.2.2 样品处理：分别取10.75g、10g 、4.64g和2.15g样品，用蒸馏水分别稀释至20ml、20ml、20ml和20ml制成混悬液。以0.4ml/20g体重灌胃量进行染毒，对应染毒剂量分别为10.75g/kgBW、10g/kgBW、4.64g/kgBW、2.15g/kgBW。
1.3 主要仪器
德国产Sartorius—CP8201电子天平(d=0.1g)，德国产梅特勒托利多AB104-S(d=0.1mg)
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1.4 试验方法
根据《保健食品安全性毒理学评价程序和方法》[1]并参照《食品安全性毒理学评价程序和方法》[2]，采用霍恩氏法进行试验。
1.4.1染毒途径、剂量和灌胃体积：采用经口染毒途径。根据预试验结果，共设21.5g/kg BW、10.0g/kg BW、4.64g/kg BW和2.15g/kg BW四个剂量组和一个空白对照组，其中21.5g/kg BW剂量组的动物需要用10.75g/kgBW的样品以0.4ml/20g体重灌胃量分2次染毒(间隔4h)，另三剂量组均以0.4ml/20g体重灌胃量一次灌胃染毒。
1.4.2染毒前将小鼠禁食16h，不限制饮水。染毒后连续观察14d，主要观察小鼠的精神状态、活动、饮食、毛发、大小便、气胀、腹泻、便秘、口鼻有无异常分泌物等情况并记录出现中毒症状的时间。如果动物有死亡，记录死亡数、死亡时间，对死亡动物解剖观察其心、肝、脾、肺和肾等主要器官的组织变化。在第7d、第14d称量体重并计算14d增重。未死亡小鼠，实验第14d处死，解剖观察其心、肝、脾、肺和肾等主要器官的组织变化。
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1.5统计学方法
所有数据用SPSS16.0统计软件进行录入和统计。各组数据以±s表示，各组均数间差异采用方差分析。
2 结果
2.1 对小鼠一般体征的影响
在给予乳香、凌霄花等中药提取物21.5g/kgBW、10.00g/kgBW、4.64g/kgBW和2.15g/kgBW灌胃后，部分小鼠表现为精神状态不佳，活动减少。随后，小鼠活动正常，初步考虑为灌胃影响所致。不过，染毒后，除葛根、皂角刺和淡竹叶3种中药提取物外，凌霄花、玫瑰花、乳香、旋覆花、垂盘草、石斛、百部、茯神、钩藤等其它9种中药提取物最高剂量组均出现了程度不等的腹泻症状。除死亡动物外，幸存动物的腹泻症状均在36小时内消失。除此之外，连续观察14d，所有幸存小鼠毛色光洁，未出现其它的不良情况。
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2.2 染毒后动物死亡情况及染毒前后的体重变化情况
结果显示，部分中药提取物的高剂量组增重有低剂量组和对照组有显著性差异，具体如下：
凌霄花雄性动物中，高剂量组的增重均明显低于低剂量组和对照组(P< 0.01)；雌性动物中高剂量组的增重明显低于对照组(P< 0.05)。
乳香提取物雄性动物中高剂量组的增重均明显低于低剂量组和对照组(P< 0.01)。
旋覆花雄性动物中10 g/kgBW和4.64 g/kgBW剂量组的增重均明显低于对照组(P< 0.05)；雌性动物中最高剂量组的增重明显低于低剂量组和对照组(P< 0.01)，此外，4.64 g/kgBW的增重明显低于2.15 g/kgBW组(P< 0.05)。
垂盘草提取物雄性动物中各剂量组的增重均明显低于对照组(P< 0.05)。
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石斛提取物雄性动物中各剂量组的增重均明显低于对照组(P< 0.05)且存在剂量-反应关系；雌性动物中10 g/kgBW组的增重明显低于对照组(P< 0.01)。
百部提取物雄性动物中除10 g/kgBW组与对照组间无显著性差异(P>0.05)外，其它各组的增重均明显低于对照组(P< 0.01)。
皂角刺提取物雄性动物中4.64g/kgBW组的增重明显高于对照组(P< 0.05)，；雌性动物中其它各剂量组的增重均明显高于对照组和最高剂量组(P< 0.05)。
淡竹叶提取物雄性动物中其它各组的增重均明显低于低剂量组和对照组(P< 0.01)；雌性动物中除4.64g/kgBW组外，其它各组的增重均明显低于对照组(P< 0.01)，其中，以10g/kgBW组最为明显。
茯神提取物雌性动物中10g/kgBW组和2.15g/kgBW组的增重均明显高于其它剂量组和对照组(P< 0.05)。
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钩藤提取物雄性动物中21.5 g/kgBW组和4.64g/kgBW组的增重均明显低于对照组(P< 0.05)。
此外，玫瑰花、葛根等中药提取物各组间均无显著性差异(P>0.05)。
2.3 对心、肝、胃、脾、肺和肾等脏器的影响
结果显示，凌霄花、葛根、旋覆花、石斛、皂角刺、淡竹叶等6种中药提取物至试验结束，各剂量组动物未见死亡。而玫瑰花、乳香、垂盘草、百部、茯神、钩藤等6种中药提取物都是在最高剂量组见少量动物死亡，解剖结果发现，死亡动物除胃内有大量内容物外，其它器官和组织未见异常。试验结束后，处死所有动物并解剖，两种提取物的小鼠心、肝、胃、脾、肺、肾等主要脏器均未见异常。
2.4 各中药提取物的LD50情况根据各中药提取物各剂量组的小鼠死亡情况可获知各中药提取物的雄性和雌性小鼠经口LD50值均大于21.5 g/kg BW。
, 百拇医药
3 讨 论
实验观察发现，在给予中药提取物后，部分小鼠表现为精神状态不佳，活动减少，较安静。除死亡的动物外，其它动物均在染毒后24h内恢复正常。各中药提取物在染毒后，除最高剂量组有少数动物出现轻微的腹泻症状外，其它各剂量组均未观察到明显的腹泻症状。除此之外，连续观察14d，所有幸存小鼠未见动物外观行为变化及中毒症状，动物饮食活动正常，皮毛干净、光滑柔顺，眼、鼻无分泌物，黏膜无充血。呼吸、心跳正常。根据《保健食品安全性毒理学评价程序和方法》中所规定的急性毒性分级情况来看，本研究中，这些中药提取物的雄性和雌性小鼠经口LD50值均大于21.5 g/kgBW，属无毒级别。但是，本研究发现，在大剂量给予这些中药提取物后，动物部分死亡，提示，大剂量给予这些中药提取物后，有一定的毒性。
从解剖情况来看，各中药提取物的动物心、肝、胃、脾、肺、肾等主要脏器均未见异常，提示这些中药提取物的毒性不大。
, http://www.100md.com 不过，从试验前后的体重变化来看，除玫瑰花、葛根两种提取物的体重变化不明显外，其它各中药提取物的体重变化均比较明显。其中，凌霄花、乳香、旋覆花、垂盘草、石斛、百部、淡竹叶、钩藤等中药提取物的增重均明显低于对照组，但皂角刺和茯神的增重却明显高于对照组。另外，凌霄花、淡竹叶提取物高剂量组的增重均明显低于低剂量组。提示大部分中药提取物对体重具有一定的影响。
目前，针对中药提取物的药理和毒理研究还很少，很多数据和资料都不完整，其机制都要有待于深入研究和探讨。本研究也只是在急性毒性方面对上述12种重要提取物进行了试验并探讨了相应的LD50值，希望本研究结果对相关人员会有一定的帮助。
参考文献
[1]卫生部. 保健食品毒理学安全性评价规范.2003：13-25
[2]中华人民共和国国家标准.GB15193.3-2003急性毒性试验.北京：中国标准出版社，2003：17-31, 百拇医药(陈小青 龙再浩 马明 马中春 虞维娜)
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