轻型β-地中海贫血不同基因型携带者平均红细胞体积(MCV)水平观察
【摘要】目的 通过观察常见轻型β-地中海贫血平均红细胞体积(MCV)的变化，探讨β-珠蛋白基因点突变对红细胞生成和破坏所造成的影响。方法 采用回顾性分析，选择观察经聚合酶链反应(PCR)结合反向点杂交(RDB)技术分析确诊的正常组和7种基因突变组(其中β0 4种，β+ 2种和HbE)的MCV水平表达，各组间MCV的比较采用方差分析中多重比较的Newman-Keuls (SNK)检验。结果 7种基因突变组的MCV水平均明显低于正常组，尤以β0组的减低最多，β+ 组次之，HbE组减低最少。β0组内各基因型的MCV水平无显著差别，而β+ 组内各基因型的MCV水平有显著性差别。结论 MCV的水平变化可间接反映轻型β-地中海贫血中β-珠蛋白链数量的平衡程度及由此而影响到的红细胞充盈程度，反之也可用于验证基因分析结果的可能性。
【关键词】轻型β-地中海贫血；基因型；MCV
【中图分类号】R556【文献标识码】A【文章编号】1004-5511(2012)06-0100-01
, http://www.100md.com
β-地中海贫血主要是由于珠蛋白基因点突变造成珠蛋白生成障碍性贫血，为常染色体隐形遗传疾病，主要是纯合子发病；而杂合子中正常珠蛋白基因可以掩盖突变珠蛋白基因带来的缺陷而成为无贫血症状或轻度贫血的地贫基因携带者，亦即轻型β-地中海贫血，其基因表型通常为β0/βN、β+/βN，在广西轻型β-地中海贫血基因突变类型包括β0/βN的CD17、CD41-42、CD71-72、IVS-1-1和β+/βN 的-28、IVS-2-654 及CD26(βE)等7种[1]。本文通过观察轻型β-地中海贫血常见基因携带者平均红细胞体积(MCV)水平的变化，探讨珠蛋白基因点突变对血红蛋白生成所造成的影响，为循证医学提供实验依据。
1 资料与方法
1.1 对象 采用回顾性分析，选择2010年10月～2011年9月到我院门诊进行婚前健康检查者共189人，其中男87例，女102例，年龄22～41岁，平均年龄27岁，经地贫基因分析确诊正常组38例，CD41-42-TCCT(41-42M) 49例，CD17 A变T (17M) 42例，IVS-2-654 C变T(654M)15例，CD26 G变A (βEM)11例，CD-28 A变G(28M)11例，IVS-1-1 G变T(IVS-1-1M)11例，CD71-72加A (71-72M)12例，所有病例均排除其他血液系统疾病且近期未接受过生物医学治疗。
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1.2 检测方法(1)采集EDTA2+抗凝静脉全血2ml，用日本东亚Sysmex XT 1800i全自动血液分析仪及其配套试剂测定MCV，严格按照标准操作程序进行。(2)β-地贫基因诊断采用聚合酶链反应(PCR)结合反向点杂交(RDB)技术,检测人群8个常见突变位点( TATAbox -29,TATAbox - 28, CD17, CD41 - 42, CD43, CD26 (βE ) , CD71 /72, IVS2nt654) 和9 个“稀少”突变位点( TATAbox - 32,TATAbox - 30, Cap + 40～ + 43, IVS1nt, CD14 - 15, CD27 /28,IVS1 - 1, IVS1 - 5, CD31) 。试剂盒由中山大学达安生物有限公司提供，严格按照操作说明书进行。(3) 统计学处理：任意两组间均数的比较采用方差分析中的 Newman-Keuls (SNK)检验。
2 结果
3 讨论
, 百拇医药
β-珠蛋白基因发生转录突变和转录后的正常剪切受到影响致使β-链合成减少从而引起β+-地中海贫血的发生，如-28、IVS-2-654。β-珠蛋白基因发生剪切位点突变、无义突变、移码突变可致β-链不能合成或功能完全丧失从而引起β0-地中海贫血的发生，如IVS-1-1、CD17、CD41-42、CD71-72[2]。血红蛋白E(HbE )是第二最常见的异常血红蛋白,是由β珠蛋白基因第26位的谷氨酸被赖氨酸取代所产生(CD26),因而影响了mRNA 前体剪接加工的效率,降低了β珠蛋白基因的表达,所以HbE 是一种β地贫样的血红蛋白病。HbE 杂合子不贫血无临床症状, HbE 纯合子仅有轻度贫血[3]。从表1的结果可看出任一基因型的轻型β-地中海贫血的MCV水平都明显低于正常对照组，其中β0-地中海贫血的MCV水平降低尤为明显，且β0组内各基因型的MCV水平无明显差异；β+-地中海贫血的MCV水平较β0组为高，且该组内各基因型MCV水平有明显差异；上述这些变化与β-珠蛋白链有无合成及合成量的多少及功能有无缺失密切相关。HbE的MCV水平降低最轻，原因为虽然HbE氨基酸替代位置在α1β1接触面，但谷氨酸与赖氨酸的理化性质相近，故血红蛋白分子稳定性和功能改变不明显[4]。基因型为IVS-2-654的轻型β-地中海贫血虽属于β+-地中海贫血，但其MCV水平与β0-地中海贫血的MCV水平相仿，过去一直认为其属于β0-地中海贫血，但是近期通过定量测定和直接序列测定，首次发现此种突变不仅主要产生了一种加工异常的mRNA，而且还产生少部分(含量约15%)有意义的正常β-珠蛋白mRNA，因而将它归于β+-地中海贫血[5]；但可能由于其正常肽链的数量极少，不足以维持红细胞的充盈，因此MCV仍表现为低水平。
, 百拇医药
综上所述，轻型β-地中海贫血其MCV水平低于正常，并且由于β-珠蛋白基因的点突变类型不同而影响到β-珠蛋白链的合成及功能从而导致MCV水平有所差异，具体表现大致为HbE MCV>β+-地中海贫血MCV>β0-地中海贫血MCV，因此测定MCV可间接反映轻型β-地中海贫血中β-珠蛋白链数量的平衡程度，反之也可用于验证基因分析结果的可能性，为循证医学提供实验依据。
参考文献
[1]陈智，杨侃，覃靖，等.广西883例轻型β地中海贫血基因型别分析及预测性产前诊断[J].华夏医学，2006，19(1):92-94.
[2]徐湘民，张新华，陈荔丽.地中海贫血预防控制操作指南[M].北京：人民军医出版社，2011：15.
[3]朱凌，罗瑞贵，周天红，等.广西地区β地中海贫血基因突变类型分析[J].华南国防医学杂志，2009，23(2):41-43.
[4]李玉林.分子病理学[M].北京：人民卫生出版社，2002:166.
[5]余元勋.中国疾病相关基因与基因诊断[M].安徽：安徽科学技术出版社.2007:161-162., 百拇医药(莫翔)
【关键词】轻型β-地中海贫血；基因型；MCV
【中图分类号】R556【文献标识码】A【文章编号】1004-5511(2012)06-0100-01
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β-地中海贫血主要是由于珠蛋白基因点突变造成珠蛋白生成障碍性贫血，为常染色体隐形遗传疾病，主要是纯合子发病；而杂合子中正常珠蛋白基因可以掩盖突变珠蛋白基因带来的缺陷而成为无贫血症状或轻度贫血的地贫基因携带者，亦即轻型β-地中海贫血，其基因表型通常为β0/βN、β+/βN，在广西轻型β-地中海贫血基因突变类型包括β0/βN的CD17、CD41-42、CD71-72、IVS-1-1和β+/βN 的-28、IVS-2-654 及CD26(βE)等7种[1]。本文通过观察轻型β-地中海贫血常见基因携带者平均红细胞体积(MCV)水平的变化，探讨珠蛋白基因点突变对血红蛋白生成所造成的影响，为循证医学提供实验依据。
1 资料与方法
1.1 对象 采用回顾性分析，选择2010年10月～2011年9月到我院门诊进行婚前健康检查者共189人，其中男87例，女102例，年龄22～41岁，平均年龄27岁，经地贫基因分析确诊正常组38例，CD41-42-TCCT(41-42M) 49例，CD17 A变T (17M) 42例，IVS-2-654 C变T(654M)15例，CD26 G变A (βEM)11例，CD-28 A变G(28M)11例，IVS-1-1 G变T(IVS-1-1M)11例，CD71-72加A (71-72M)12例，所有病例均排除其他血液系统疾病且近期未接受过生物医学治疗。
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1.2 检测方法(1)采集EDTA2+抗凝静脉全血2ml，用日本东亚Sysmex XT 1800i全自动血液分析仪及其配套试剂测定MCV，严格按照标准操作程序进行。(2)β-地贫基因诊断采用聚合酶链反应(PCR)结合反向点杂交(RDB)技术,检测人群8个常见突变位点( TATAbox -29,TATAbox - 28, CD17, CD41 - 42, CD43, CD26 (βE ) , CD71 /72, IVS2nt654) 和9 个“稀少”突变位点( TATAbox - 32,TATAbox - 30, Cap + 40～ + 43, IVS1nt, CD14 - 15, CD27 /28,IVS1 - 1, IVS1 - 5, CD31) 。试剂盒由中山大学达安生物有限公司提供，严格按照操作说明书进行。(3) 统计学处理：任意两组间均数的比较采用方差分析中的 Newman-Keuls (SNK)检验。
2 结果
3 讨论
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β-珠蛋白基因发生转录突变和转录后的正常剪切受到影响致使β-链合成减少从而引起β+-地中海贫血的发生，如-28、IVS-2-654。β-珠蛋白基因发生剪切位点突变、无义突变、移码突变可致β-链不能合成或功能完全丧失从而引起β0-地中海贫血的发生，如IVS-1-1、CD17、CD41-42、CD71-72[2]。血红蛋白E(HbE )是第二最常见的异常血红蛋白,是由β珠蛋白基因第26位的谷氨酸被赖氨酸取代所产生(CD26),因而影响了mRNA 前体剪接加工的效率,降低了β珠蛋白基因的表达,所以HbE 是一种β地贫样的血红蛋白病。HbE 杂合子不贫血无临床症状, HbE 纯合子仅有轻度贫血[3]。从表1的结果可看出任一基因型的轻型β-地中海贫血的MCV水平都明显低于正常对照组，其中β0-地中海贫血的MCV水平降低尤为明显，且β0组内各基因型的MCV水平无明显差异；β+-地中海贫血的MCV水平较β0组为高，且该组内各基因型MCV水平有明显差异；上述这些变化与β-珠蛋白链有无合成及合成量的多少及功能有无缺失密切相关。HbE的MCV水平降低最轻，原因为虽然HbE氨基酸替代位置在α1β1接触面，但谷氨酸与赖氨酸的理化性质相近，故血红蛋白分子稳定性和功能改变不明显[4]。基因型为IVS-2-654的轻型β-地中海贫血虽属于β+-地中海贫血，但其MCV水平与β0-地中海贫血的MCV水平相仿，过去一直认为其属于β0-地中海贫血，但是近期通过定量测定和直接序列测定，首次发现此种突变不仅主要产生了一种加工异常的mRNA，而且还产生少部分(含量约15%)有意义的正常β-珠蛋白mRNA，因而将它归于β+-地中海贫血[5]；但可能由于其正常肽链的数量极少，不足以维持红细胞的充盈，因此MCV仍表现为低水平。
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综上所述，轻型β-地中海贫血其MCV水平低于正常，并且由于β-珠蛋白基因的点突变类型不同而影响到β-珠蛋白链的合成及功能从而导致MCV水平有所差异，具体表现大致为HbE MCV>β+-地中海贫血MCV>β0-地中海贫血MCV，因此测定MCV可间接反映轻型β-地中海贫血中β-珠蛋白链数量的平衡程度，反之也可用于验证基因分析结果的可能性，为循证医学提供实验依据。
参考文献
[1]陈智，杨侃，覃靖，等.广西883例轻型β地中海贫血基因型别分析及预测性产前诊断[J].华夏医学，2006，19(1):92-94.
[2]徐湘民，张新华，陈荔丽.地中海贫血预防控制操作指南[M].北京：人民军医出版社，2011：15.
[3]朱凌，罗瑞贵，周天红，等.广西地区β地中海贫血基因突变类型分析[J].华南国防医学杂志，2009，23(2):41-43.
[4]李玉林.分子病理学[M].北京：人民卫生出版社，2002:166.
[5]余元勋.中国疾病相关基因与基因诊断[M].安徽：安徽科学技术出版社.2007:161-162., 百拇医药(莫翔)