红景天干预对高原急性低氧条件下大鼠海马CA1区NCAM表达影响(1)
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[摘要]目的 观察高原急性低氧条件下红景天干预对大鼠海马CA1区NCAM的表达变化,探讨红景天通过NCAM在机体海马神经元在低氧应激反应中的作用。方法 45只大鼠随即分为3组：正常对照组、用药组和生理盐水组在第3d取大鼠海马,常规免疫组化检测NCAM蛋白的表达变化。结果 NCAM在高海拔大鼠海马CA1区神经细胞NCAM的表达在第3d是明显低于正常(P <0.05)，在用红景天干预组则与正常接近(P >0.05)。结论 红景天干预组高原低氧应激反应后NCAM基因表达有促进作用,提示其在神经损伤修复过程中可能起重要作用。
关键词： 红景天 低氧 神经细胞粘附因子海马
Effects of NCAM in hippocampal subfield CA1 with acute Hypoxia at high Altitudes in rats by Rhodiola herb
ZHANG Xiao-yan , GENG Pai-li , ZHANG Xian-jun , JIA Wei, PU Xiao-yan
Abstract：Objective To study effects of NCAM in hippocampal subfield CA1 with acute hypoxia at high Altitudes in rats by Rhodiola herb. Discussion the function with the hippocampal neuron's in acute hypoxia stress response by Rhodiola herb.Method 45 health rats were divided into four groups—normal group 、Rhodiola herb groups 、NS group.NCAM expression was tested in protein level by immunocytochemistry analysis at 3 days later.Result The expression of NCAM protein showed a significant difference between the NS group and normal group(P <0.05)，but close the Rhodiola herb group and normal group(P >0.05).Conclusion Rhodiola herb has the promoter action to the NCAM expression and may play an imporment role in nerve repair.
KEY WORDS： Rhodiola herb；hypoxia;NCAM;hippocampus
中图分类号：R364. 1 文献标识码：A文章编号：1004-7484(2011)05-0084-03
红景天为景天科红景天属植物，关于红景天的现代研究始于加世纪70年代，前苏联学者将红景天定为“适应原”样物质，并报告具有抗缺氧、抗疲劳、抗辐射等药理作用，对神经元细胞具有促进生长及减少神经细胞的凋亡等独特的作用[1]。目前,对急性高原病的研究成为热点，而神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecule , NCAM)是细胞粘附分子的重要成分。NCAM主要存在于神经系统中,它介导神经元之间的识别和粘附,在神经系统生长、再生和保护中发挥着重要作用[2]。本实验观察红景天对高原急性低氧环境中大鼠海马组织内NCAM表达的影响, 探讨NCAM在高原低氧中对脑海马功能保护中的作用, 进一步揭示脑海马高原低氧环境中适应的细胞分子机制。
1材料与方法
1.1实验动物
雄性SD大鼠150只购自北京大学医学院实验动物中心,体重(140g～180g)。
1.2药品及试剂
红景天购自青海三普药业有限公司,。每1 g粉末相当于生药4.26 g。NCAM 抗体(Santa Cruz)，生物素-链霉素抗生物素蛋白检测系统(SP)试剂盒等购自北京中杉公司。
2实验方法
2.1实验分组
平原对照组(HO)、红景天灌胃三天后运至高原组(H1)、生理盐水灌胃三天后运至高原组(H2)每组15是只大鼠。实验组大鼠运至青海省泽库县(海拔4100m)饲养,运抵后于第3天在当地取材。
2.2实验用药
根据动物与人体体表面积折算法, 药物用量为人体用药剂量的20 倍。于运往高原前4天开始灌胃给药, 灌胃共进行4天, 每日一次。红景天组,以5 g/(kg•d)的生药比例给药;模型组用等量生理盐水灌胃。
2.3标本采集
每组大鼠腹腔注射10%水合氯醛(5ml/kg) 麻醉大鼠,断头处死快速取脑海马组织置于4%多聚甲醛中固定。
2.4 NCAM 免疫组化染色
对所取组织常规石蜡包埋,取大脑及海马冠状位连续3μm 切片,贴于多聚赖氨酸处理过的载玻片上,制作石蜡切片。切片脱蜡至水,微波炉抗原热修复,用3 %过氧化氢灭活内源性过氧化物酶。5 %～10 %正常山羊血清封闭,室温孵育30 min ,分别滴加一抗(兔抗大鼠NCAM IgG,稀释浓度1∶50) 50μl ,4 ℃孵育过夜,PBS 冲洗,应用SP 免疫组织化学检测试剂盒进行免疫组织化学染色,DAB 显色,具体步骤详见说明书。免疫组化阳性反应细胞呈棕黄色,应用Leica QWinV3 图像分析软件,每张切片取2个400倍视野,测定每个野的阳性细胞个数,细胞总数及灰度值,然后计算平阳性细胞的平均灰度值 ......
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