miR—29在妊娠期肝内胆汁淤积症中的表达及意义
【摘要】 目的 研究miR-29在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者中的表达及其在妊娠期肝内胆汁淤积症中的作用。方法 提取50例ICP患者及50例同期正常妊娠妇女外周血RNA，Realtime PCR检测表达。结果 miR-29在ICP患者中明显高于正常妊娠妇女。血清miR-29水平与ICP患者的年龄、孕周、经产与否、胎数无关，但是与围产儿预后相关。结论 血清miR-29在ICP的诊断和围产儿预后预测中发挥重要作用。
【关键词】 妊娠期肝内胆汁淤积症；miR-29；临床意义
doi：103969/jissn1004-7484(s)201306040 文章编号：1004-7484(2013)-06-2840-02
妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)是发生在晚期妊娠的肝脏疾病，产后可治愈。发病最初伴有瘙痒，有时出现黄疸，血胆汁酸、胆红素、丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶升高。患者的预后一般较好，但是血胆汁酸升高引起的代谢毒性可能引起早产、死胎、死产。据统计，ICP的发生率约为1%。ICP的发病原因尚不十分清楚，但研究表明，环境、激素水平及遗传因素发挥了重要作用。ICP有家族遗传性，可能与种族、地理位置相关[1]。雌激素和孕激素可能与ICP发病相关[3-4]。
microRNA是微小非编码RNA，能负调控基因的表达及mRNA的稳定性。许多研究表明miRNA在肝脏疾病中发挥着重要的作用。miR-29在胆道闭锁小鼠血清中表达增加[5]。本研究旨在探讨miR-29在ICP患者中的表达及在ICP中的临床作用。
1 材料与方法
11 临床资料 以2011年5月——2012年4月在我院诊断为妊娠期肝内胆汁淤积症的孕妇20例为研究组，年龄22-40岁，平均(281±70)岁，孕周31+1-40周，平均(35±43)周。配对同期住院30例正常产妇作为对照，年龄20-39岁，平均(275±83)岁，孕周31+5-41周，平均(376±24)周。
12 妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断依据[2-3] ①中晚期妊娠有全身瘙痒，伴或不伴有黄疸，排除其他皮肤疾病或药敏性皮炎；②血清胆汁酸大于等于16μmol/L，或者血清丙氨酸和天冬氨酸氨基转移酶大于31U/L；③分娩后症状及体征消失；④排除其他肝脏疾病。
13 外周血RNA提取 利用RNA抽提试剂盒(QIAGEN)提取5ml外周血的RNA存于-80°C。
14 miRNA检测 逆转录RNA1μg(Invitrogen试剂)。16℃30min，42℃30min，85℃10min，4℃10min，-20℃保存。Realtime PCR检测(上海吉玛生物公司)，置于Realtime PCR仪内，950°C，3分钟；950°C，12秒；620°C，35秒，40循环；熔解曲线分析从620°C开始至950°C停止。
15 统计学分析 用SPSS130软件，采用t检验，P<005，差异有统计学意义。
2 结 果
21 miR-29在ICP患者及正常妊娠妇女外周血的表达 Realtime PCR结果表明，50例ICP患者血清中miR-29的表达为对照组的2316±0753倍，差异有统计学意义(P<001)。
22 血清miR-29水平与ICP患者临床参数的关系 血清miR-29在年龄≥28岁ICP患者中的表达为对照组的2334±0753倍，<28岁患者miR-29的表达为2266±0864倍；孕周≥35的患者miR-29表达为1974±0653倍，<35的患者表达为2527±0855倍；经产妇及未产妇中的表达分别为2403±0563倍和2154±0763倍；在多胎和单胎患者中的表达分别为2215±0651和2412±0583倍，统计学分析显示血清miR-29与ICP患者的年龄、孕周、经产与否及胎数无关(P>005)。血清miR-29在围产儿正常的ICP患者中表达为1493±0571倍，在有围产儿早产、死胎、死产的ICP患者中的表达为2874±0553倍，差异有统计学意义(P<001)。
3 讨 论
ICP在不同国家对围产儿的影响不一样。ICP发病机制研究已取得了一定进展，但是仍不十分明确。miRNA在多种疾病的发生发展中发挥着重要作用，但无研究表明miRNA与ICP发病相关。本研究通过检测血清中miR-29的表达分析其在正常妊娠妇女和ICP患者中的表达差异。结果表明，血清miR-29水平在ICP患者中明显升高。随后我们分析了miR-29与ICP患者临床参数的关系。miR-29与ICP患者的年龄、孕周、经产与否及胎数无关，但与ICP患者围产儿预后相关，围产儿正常的ICP患者miR-29的水平明显低于围产儿早产、死胎、死产的ICP患者的表达。因此，血清miR-29的表达可作为ICP诊断的辅助检测指标，也可作为ICP围产儿预后预测的潜在靶点。
参考文献
[1] Glantz A，Marshall HU，Mattsson LAIntrahepatic cholestasis of pregnancy：relationships between bile acid levels and fetal complication ratesHepatology，2004；40：467–74
[2] Lammert F，Marschall HU，Glantz A，et alIntrahepatic cholestasis of pregnancy：molecular pathogenesis，diagnosis and managementJournal of Hepatology，2000；33：1012–21
[3] Reyes H，Simon FRIntrahepatic cholestasis of pregnancy：an estrogen-related diseaseSeminars in Liver Disease，1993；13：289–301
[4] Hand NJ，Horner AM，Master ZR，et alMicroRNA profiling identifies miR-29 as a regulator of disease-associated pathways in experimental biliary atresiaJ Pediatr Gastroenterol Nutr2012 Feb；54(2)：186-92
[5] Pathak B，Sheibani L，Lee RHCholestasis of pregnancyObstet Gynecol Clin North Am，2010；37：269-82, 百拇医药(黄文宇 梁锐根)
【关键词】 妊娠期肝内胆汁淤积症；miR-29；临床意义
doi：103969/jissn1004-7484(s)201306040 文章编号：1004-7484(2013)-06-2840-02
妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)是发生在晚期妊娠的肝脏疾病，产后可治愈。发病最初伴有瘙痒，有时出现黄疸，血胆汁酸、胆红素、丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶升高。患者的预后一般较好，但是血胆汁酸升高引起的代谢毒性可能引起早产、死胎、死产。据统计，ICP的发生率约为1%。ICP的发病原因尚不十分清楚，但研究表明，环境、激素水平及遗传因素发挥了重要作用。ICP有家族遗传性，可能与种族、地理位置相关[1]。雌激素和孕激素可能与ICP发病相关[3-4]。
microRNA是微小非编码RNA，能负调控基因的表达及mRNA的稳定性。许多研究表明miRNA在肝脏疾病中发挥着重要的作用。miR-29在胆道闭锁小鼠血清中表达增加[5]。本研究旨在探讨miR-29在ICP患者中的表达及在ICP中的临床作用。
1 材料与方法
11 临床资料 以2011年5月——2012年4月在我院诊断为妊娠期肝内胆汁淤积症的孕妇20例为研究组，年龄22-40岁，平均(281±70)岁，孕周31+1-40周，平均(35±43)周。配对同期住院30例正常产妇作为对照，年龄20-39岁，平均(275±83)岁，孕周31+5-41周，平均(376±24)周。
12 妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断依据[2-3] ①中晚期妊娠有全身瘙痒，伴或不伴有黄疸，排除其他皮肤疾病或药敏性皮炎；②血清胆汁酸大于等于16μmol/L，或者血清丙氨酸和天冬氨酸氨基转移酶大于31U/L；③分娩后症状及体征消失；④排除其他肝脏疾病。
13 外周血RNA提取 利用RNA抽提试剂盒(QIAGEN)提取5ml外周血的RNA存于-80°C。
14 miRNA检测 逆转录RNA1μg(Invitrogen试剂)。16℃30min，42℃30min，85℃10min，4℃10min，-20℃保存。Realtime PCR检测(上海吉玛生物公司)，置于Realtime PCR仪内，950°C，3分钟；950°C，12秒；620°C，35秒，40循环；熔解曲线分析从620°C开始至950°C停止。
15 统计学分析 用SPSS130软件，采用t检验，P<005，差异有统计学意义。
2 结 果
21 miR-29在ICP患者及正常妊娠妇女外周血的表达 Realtime PCR结果表明，50例ICP患者血清中miR-29的表达为对照组的2316±0753倍，差异有统计学意义(P<001)。
22 血清miR-29水平与ICP患者临床参数的关系 血清miR-29在年龄≥28岁ICP患者中的表达为对照组的2334±0753倍，<28岁患者miR-29的表达为2266±0864倍；孕周≥35的患者miR-29表达为1974±0653倍，<35的患者表达为2527±0855倍；经产妇及未产妇中的表达分别为2403±0563倍和2154±0763倍；在多胎和单胎患者中的表达分别为2215±0651和2412±0583倍，统计学分析显示血清miR-29与ICP患者的年龄、孕周、经产与否及胎数无关(P>005)。血清miR-29在围产儿正常的ICP患者中表达为1493±0571倍，在有围产儿早产、死胎、死产的ICP患者中的表达为2874±0553倍，差异有统计学意义(P<001)。
3 讨 论
ICP在不同国家对围产儿的影响不一样。ICP发病机制研究已取得了一定进展，但是仍不十分明确。miRNA在多种疾病的发生发展中发挥着重要作用，但无研究表明miRNA与ICP发病相关。本研究通过检测血清中miR-29的表达分析其在正常妊娠妇女和ICP患者中的表达差异。结果表明，血清miR-29水平在ICP患者中明显升高。随后我们分析了miR-29与ICP患者临床参数的关系。miR-29与ICP患者的年龄、孕周、经产与否及胎数无关，但与ICP患者围产儿预后相关，围产儿正常的ICP患者miR-29的水平明显低于围产儿早产、死胎、死产的ICP患者的表达。因此，血清miR-29的表达可作为ICP诊断的辅助检测指标，也可作为ICP围产儿预后预测的潜在靶点。
参考文献
[1] Glantz A，Marshall HU，Mattsson LAIntrahepatic cholestasis of pregnancy：relationships between bile acid levels and fetal complication ratesHepatology，2004；40：467–74
[2] Lammert F，Marschall HU，Glantz A，et alIntrahepatic cholestasis of pregnancy：molecular pathogenesis，diagnosis and managementJournal of Hepatology，2000；33：1012–21
[3] Reyes H，Simon FRIntrahepatic cholestasis of pregnancy：an estrogen-related diseaseSeminars in Liver Disease，1993；13：289–301
[4] Hand NJ，Horner AM，Master ZR，et alMicroRNA profiling identifies miR-29 as a regulator of disease-associated pathways in experimental biliary atresiaJ Pediatr Gastroenterol Nutr2012 Feb；54(2)：186-92
[5] Pathak B，Sheibani L，Lee RHCholestasis of pregnancyObstet Gynecol Clin North Am，2010；37：269-82, 百拇医药(黄文宇 梁锐根)