HPLC法测定湖南省不同产地绞股蓝药材中人参皂苷Rb1的含量
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【摘要】 目的 采用HPLC法对湖南省4个产地绞股蓝中人参皂苷Rb1含量进行测定。方法 采用甲醇回流提取，高效液相色谱法。色谱柱C18(Column 200×4.6mm，5μ)，乙腈-0.5%磷酸(20：80)为流动相；检测波长为203nm。结果 人参皂苷Rb1在0.515-5.665μg范围呈良好的线性关系，r=0.9996；人参皂苷Rb1平均回收率：97.56%，RSD为1.05%。结论 该方法可靠、便捷，可以作为控制绞股蓝药材质量的方法。同时，不同产地绞蓝中总皂苷的含量存在差异，以湖南绥宁产绞股蓝中总皂苷含量(0.53%)最高。
【关键词】 绞股蓝；人参皂苷Rb1；高效液相色谱法
文章编号：1004-7484(2013)-02-0557-02
绞股蓝[1-3](Gynostemma pentaphyllum)为葫芦科多年生草质藤本植物，有“南方人参”和“第二人参”的美誉，别名小苦药、公罗锅底、五叶藤、遍地生根、甘茶蔓等。20世纪70年代末至80年代初期，日本著名的绞股蓝研究专家永井正博等[4]先后在绞股蓝中发现了人参皂苷，并分离得到了80多种皂苷类物质，确定其为四环三萜达玛烷型结构，其中4种皂苷与4种人参皂苷同物异名。已证明绞股蓝具有减肥、降血脂、调血压、延缓衰老、预防冠心病、抑制癌细胞、调节人体生理机能、增强机体免疫力等功能。2002年卫生部将绞股蓝列为新资源药食同源保健品。绞股蓝的黄酮、多糖、微量元素等都具有很好的保健功效，但其主要药效成分是绞股蓝皂苷。本文采用高效液相色谱法对绞股蓝中人参皂苷Rb1的含量进行了测定，以期为绞股蓝的应用提供一些依据。
1 仪器、试剂与药材
LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津)；岛津SPD-10A检测器；N2000色谱工作站；HX-06型超声波清洗器(武汉恒信世纪科技有限公司)；AE-240型电子天平(梅特勒-托利多(上海)有限公司)。人参皂苷Rb1购于中国药品生物制品检定研究院，批号：704-200114。甲醇、乙腈(色谱纯试剂，天津科密欧化学试剂有限公司)，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯(均为湖南汇虹试剂有限公司提供)。药材采自湖南绥宁、桑植、浏阳、平江，经湖南省中医药研究院中药研究所生药研究室鉴定为为葫芦科多年生草质藤本植物。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.5%磷酸(20：80)为流动相；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rb1峰计算不得低于5000。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rb15.15mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备 取产自湖南绥宁绞股蓝药材粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 线性关系考察 精密吸取人参皂苷Rb1(C=0.515mg/ml)对照品溶液1、3、5、7、9、11μl进样，测定其峰面积积分值，以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y=45300x-652.28，r=0.9996。结果表明人参皂苷Rb1在0.515-5.665μg范围内具有良好的线性关系。
2.5 精密度试验 取绞股蓝药材按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液。精密吸取10μl，连续进样6次，测定其峰面积，计算RSD为1.2%。
2.6 稳定性试验 取2.5项下的供试品溶液，精密吸取10μl，于0、4、8、12、24小时进样，测定其峰面积。计算，RSD为1.6%，说明24h内供试液稳定性良好。
2.7 重复性试验 取同一批药材制成供试品溶液6份，测定含量。结果RSD1.6%，说明方法重复性好。
2.8 回收率试验 精密称取6份已知含量的本品0.3g，每份加入人参皂苷Rb1约1mg，按供试品测定项下测定。人参皂苷Rb1平均回收率为97.56%，RSD为1.05%。结果见表1。
2.9 样品含量测定 取采自湖南绥宁、桑植、浏阳、平江的绞股蓝药材，按供试品溶液的制备方法制备成供试液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，即得，结果见表2、图1、图2。
3 讨论
3.1 绞股蓝具有减肥、降血脂、调血压、延缓衰老、预防冠心病、抑制癌细胞、调节人体生理机能、增强机体免疫力等功能，其中绞股蓝皂苷是其主要药效成分。目前对绞股蓝的研究多数集中在绞股蓝总皂苷上，其中人参皂苷Rb1是皂苷的主要成分之一，文献报道，主要采用紫外分光光度法测定绞股蓝总皂苷。我们选择了人参皂苷Rb1作为绞股蓝药材含量控制指标，采用高效液相色谱法，经方法学考察和湖南省4个不同产地绞股蓝的测定，表明该方法可靠、便捷，可以作为控制绞股蓝药材的质量方法。
3.2 绞股蓝皂苷的含量与品种、产地气候、土壤条件、采收时间、采样部位等有很大关系 ......
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