CD133及CD44基因在上皮性卵巢癌中的表达及其意义
【摘 要】目的::探讨卵巢癌中CD133及CD44的表达情况及其临床病理学意义。方法：采用免疫组化方法检测46例上皮性卵巢癌、18例良性上皮性卵巢肿瘤组织及10例正常卵巢组织中CD133及CD44的表达情况。结果：正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤组织及卵巢癌中CD133及CD44的表达呈升高趋势，组间差异有统计学意义(P<0.05)。CD133及CD44表达水平与卵巢癌的分期、病理分级及淋巴结转移相关(P<0.05)，而与年龄及组织类型无关。Spearman相关性分析显示CD133表达与CD44的表达呈正相关(r=0.589,P<0.05)。结论：CD133及CD44的高表达可能与卵巢癌的发生、发展有关。
【关键词】上皮性卵巢癌；CD133；CD44；免疫组织化学
【中图分类号】 R 737.31 【文献表识码】A 【文章编号】1004- 7484(2012)04- 0063- 02
【Abstract】Objective：To investigate the expressions of CD133 and CD44and their correlations with the clinicopathological feature in epithelial ovarian cancers. Methods：CD133 and CD44 protein levels were detected in 46 cases of epthelial ovarian cancer、18 cases of benign ovarian tumor and 10 cases of normal ovarian tissues by immunohistochemistry . Results：The positive expression rates of CD133 and CD44 protein in normal ovarian tissues, benign ovarian tumor and epthelial ovarian cancer were gradually increased, statistical difference was significant(P<0.05). The expression of CD133 and CD44 protein were related to ovarian cancer stage , differentiation degree and lymph node metastasis., but they were not correlated with patient’s age and histological subtype. In addition, the expression of CD133 protein was positively related to that of CD44 protein(r=0.589,p﹤0.05). Conclusions：Over-expression of CD133 and CD44 protein play an important role in the development of ovarian cancer.
【Key words】epithelial ovarian cancer; CD133; CD44; immunohistochemisty
卵巢癌起病隐匿，早期不易发现，易转移，在各类妇科恶性肿瘤中死亡率位居第一。CD133是一种肿瘤干细胞标志物，研究发现，CD133+肿瘤干细胞表现为更强的增殖能力和不良的预后。CD44作为一种细胞黏附分子，具有多种生物学功能，其在肿瘤的发生、发展和转移中发挥重要作用。为此本研究采用免疫组织化学法检测CD133及CD44在卵巢上皮性癌组织中的表达,探讨CD133及CD44在卵巢上皮性癌发生、发展中的作用及其与临床病理特征的关系。
1 材料与方法
1.1材料 选取邢台市人民医院病理科2007年12月至2008年12月期间存档蜡块，其中卵巢上皮来源的良性肿瘤18例，恶性肿瘤46例，包括高分化16例,中分化20例,低分化10例;有淋巴转移者11例,无转移35例,另取因宫颈癌手术行卵巢切除经病理证实为正常卵巢组织患者10例,年龄26～70岁,平均50岁。术前均未行放、化疗或服用激素类药物。
1.2方法 所有标本均经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,4μm厚连续切片,分别进行HE和免疫组化染色.免疫组化采用S-P法.将制好的组织切片,经二甲苯脱蜡,梯度乙醇脱水后行免疫组化染色. 操作步骤按试剂盒说明书进行.DAB显色,苏木精复染,中性树胶封固.PBS代替一抗作为阴性对照.
1.3 结果判定 CD133蛋白阳性表达主要定位于细胞膜和细胞浆，表现为细胞膜和细胞浆内有棕黄色颗粒。显微镜下盲法阅片， 400×高倍镜下随机观察10个视野，每个视野计数100个细胞中的阳性细胞数。阳性细胞数占癌细胞数的10%以上为阳性，阳性细胞数低于癌细胞总数的10%或癌细胞全部不着色为阴性。
CD44蛋白阳性表达于细胞膜和细胞浆，表现为细胞膜和细胞浆内有棕黄色颗粒。显微镜下盲法阅片，显微镜400×高倍镜下随机观察10个视野，每个视野计数100个细胞中的阳性细胞数。未见阳性细胞为(-)，阳性细胞数0%-5%(+)，5%-25%(++)，>25%(+++)。
1.4 统计学处理 采用SPSSl1.5统计软件进行统计分析,χ2检验及求Spearman相关系数.
2 结果
2.1 CD133及CD44在不同卵巢组织中的表达 (表1、2、)
CD133及CD44在正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤及卵巢癌细胞胞膜和胞浆中表达阳性(图1，2)，二者阳性表达率在正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤及卵巢癌三组间呈增高趋势，组间差异性有统计学意义(χ2=11.720,P<0.05；χ2=13.508,P<0.05)。
表1 CD133在不同卵巢组织中的表达
表2 CD44在不同卵巢组织中的表达
2.2 CD133及CD44蛋白表达与卵巢癌临床病理特征的关系及其表达的相关性(表3、4)
CD133及CD44表达水平与卵巢癌的分期、病理分级及淋巴结转移相关(P<0.05)，而与年龄及组织类型无关。Spearman相关性分析显示CD133表达与CD44的表达呈正相关(P<0.05)。
表3 CD133及CD44蛋白与临床病理特征的关系
表4 CD133及CD44蛋白表达的相关性
3 讨论
CD133属于Prominin家族成员,最早发现表达于造血干细胞/祖细胞和神经上皮干细胞表面，以及在各类原始细胞如间质干细胞、内皮祖细胞等细胞中特异性表达，并作为干细胞的标志物分离鉴定多种组织干细胞。一些学者研究发现，某些肿瘤细胞中有CD133+细胞，这种细胞只占肿瘤细胞的极少部分，但具有自我更新、自我分化、自我增殖能力，故认为CD133+肿瘤干细胞主宰了肿瘤的恶性表型和浸润能力。Singh[1]分析脑膜胶质瘤中CD133表达情况， CD133+细胞在3.5-46.3%之间，在相同条件下分别对CD133+、CD133-细胞进行培养，培养中CD133+细胞呈瘤球样悬浮生长，且能继续增殖，而CD133-不能增殖和形成瘤球。据此认为人脑肿瘤中的CD133+细胞就是肿瘤干细胞。此外,O’Brienet al[2]用流式细胞仪纯化结肠癌组织中的CD133阳性细胞,并把他移植到小鼠肾被膜下使其形成肿瘤,结果提示CD133可能为结肠癌干细胞的标志物. 李亚卓[3]等研究发现胃癌组织中的CD133阳性细胞越多其分化越差、浸润越深、分期越晚,同时淋巴结转移数目越多,提示肿瘤组织中CD133阳性细胞越多,含有的癌干样细胞就越多.本研究发现CD133在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤及卵巢癌组织中阳性表达率呈增高趋势,且组间差异有统计学意义。提示CD133的表达与卵巢癌的发生有明确的关系，同时CD133表达水平与卵巢癌的分期、病理分级及淋巴结转移相关.
近年研究发现CD44的高表达与多种人体恶性肿瘤的发生发展和侵袭转移有关。Patrawala L[4]等研究发现，CD44阳性的前列腺癌细胞与CD44阴性的前列腺癌细胞比较，具有更强的增殖能力、克隆形成能力、致瘤能力及转移能力，其致瘤性较CD44阴性细胞强100倍。在乳腺癌[5]、口腔癌[6]和肾细胞癌[7]等恶性肿瘤中CD44蛋白阳性表达的癌细胞比阴性的有更强的侵袭转移能力，说明CD44蛋白的阳性表达在癌细胞的发生发展及肿瘤的侵袭转移方面起到重要的作用。CD44的黏附性在癌细胞的侵袭转移中起到的双重作用有关：一方面由于同质型黏附作用减弱，使肿瘤细胞从同质黏附的原发灶脱离；另一方面由于异质型黏附作用增强，肿瘤细胞借助黏附而移动和转移。卵巢癌具有癌细胞可以从癌体脱落，进入腹水，继而在腹膜、网膜、肠浆膜表面广泛种植转移等特点，因此它与细胞黏附分子的关系近年来倍受重视，尤其是CD44蛋白与卵巢癌的关系最为密切。
本研究结果显示CD44在正常卵巢上皮组织几乎没有表达，在卵巢上皮细胞瘤及卵巢上皮细胞癌中的阳性表达率分别为11.1%、47.8%。在卵巢上皮细胞瘤和卵巢上皮细胞癌中CD44的阳性表达率明显高于正常卵巢上皮组织(P<0.05)，在卵巢上皮性癌高分化组织中的阳性表达率为18.8%，在中分化组织中的阳性表达率为60%，在低分化组织中的阳性表达率为70%，阳性表达率逐渐增高，其阳性表达与卵巢上皮性癌的组织分化程度有关(P<0.05)。本实验的研究结果说明卵巢上皮性癌中CD44的高表达赋予癌细胞较强的侵袭转移能力,可以作为预测卵巢上皮性癌侵袭转移的一个有效的指标。相关性分析发现卵巢癌中CD133表达与CD44的表达呈正相关，但二者之间具体调控机制尚需进一步研究。
参考文献：
[1] Singh S K, Hawkins C, ID, et al.Identification of human brain tumour initiating cell[J]..Nature,2004,432(7015):396- 401
[2] O’Brien CA,Pollett A,Gallinger S,Dick JE.A human colon cancer cell capable of initiating tumour growth in immunodeficientmice[J].Nat ure.2 007;445:106- 110
[3]李亚卓,王凤华,赵坡.CD133、Ki- 67在胃癌的表达及临床病理意义[J].世界华人消化杂志2008;16(28):3167- 3171.
[4]Patrawala L, Calhoun T, Sehneider Broussard R ,et al. Highly purified CD44+ prostate caneer cells from xenograft human tumors are enriehed intumorigenic and metastatic progenitor cells[J]. Oneogene. 2006, 25(12):1696- 1708.
[5] DACH M E, CHAR CHANTIA, BR ASOULIS E, et al Immunohisto chemical expression of extracellu larmatrix components tenascin, fibronectin, collagen type IV and lamin in breast cancer their prognostic value and role in tumour invasion and progression [J]. Eur J Cancer, 2002, 38(18): 2362- 2370.
[6] LM S D, YOUNG A N, PANER G P, et al. Prognostic role of CD44 cell adhesion molecule expression in primary and metastatic renal cell carcinoma a clinicopathologic study of 125 cases [J].Virchows Arch, 2008, 452(1): 49- 55
[7]KOSUNEN A, PIR INEN R , R OPPONEN K, et al CD44 expression and its relationship with MMP- 9, clinicopathological factors and survival in oral squamous cell carcinoma[J]. Oral Onco, 2007, 43(1): 51- 59., 百拇医药(李会珍 李伟伟 李蒙)
【关键词】上皮性卵巢癌；CD133；CD44；免疫组织化学
【中图分类号】 R 737.31 【文献表识码】A 【文章编号】1004- 7484(2012)04- 0063- 02
【Abstract】Objective：To investigate the expressions of CD133 and CD44and their correlations with the clinicopathological feature in epithelial ovarian cancers. Methods：CD133 and CD44 protein levels were detected in 46 cases of epthelial ovarian cancer、18 cases of benign ovarian tumor and 10 cases of normal ovarian tissues by immunohistochemistry . Results：The positive expression rates of CD133 and CD44 protein in normal ovarian tissues, benign ovarian tumor and epthelial ovarian cancer were gradually increased, statistical difference was significant(P<0.05). The expression of CD133 and CD44 protein were related to ovarian cancer stage , differentiation degree and lymph node metastasis., but they were not correlated with patient’s age and histological subtype. In addition, the expression of CD133 protein was positively related to that of CD44 protein(r=0.589,p﹤0.05). Conclusions：Over-expression of CD133 and CD44 protein play an important role in the development of ovarian cancer.
【Key words】epithelial ovarian cancer; CD133; CD44; immunohistochemisty
卵巢癌起病隐匿，早期不易发现，易转移，在各类妇科恶性肿瘤中死亡率位居第一。CD133是一种肿瘤干细胞标志物，研究发现，CD133+肿瘤干细胞表现为更强的增殖能力和不良的预后。CD44作为一种细胞黏附分子，具有多种生物学功能，其在肿瘤的发生、发展和转移中发挥重要作用。为此本研究采用免疫组织化学法检测CD133及CD44在卵巢上皮性癌组织中的表达,探讨CD133及CD44在卵巢上皮性癌发生、发展中的作用及其与临床病理特征的关系。
1 材料与方法
1.1材料 选取邢台市人民医院病理科2007年12月至2008年12月期间存档蜡块，其中卵巢上皮来源的良性肿瘤18例，恶性肿瘤46例，包括高分化16例,中分化20例,低分化10例;有淋巴转移者11例,无转移35例,另取因宫颈癌手术行卵巢切除经病理证实为正常卵巢组织患者10例,年龄26～70岁,平均50岁。术前均未行放、化疗或服用激素类药物。
1.2方法 所有标本均经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,4μm厚连续切片,分别进行HE和免疫组化染色.免疫组化采用S-P法.将制好的组织切片,经二甲苯脱蜡,梯度乙醇脱水后行免疫组化染色. 操作步骤按试剂盒说明书进行.DAB显色,苏木精复染,中性树胶封固.PBS代替一抗作为阴性对照.
1.3 结果判定 CD133蛋白阳性表达主要定位于细胞膜和细胞浆，表现为细胞膜和细胞浆内有棕黄色颗粒。显微镜下盲法阅片， 400×高倍镜下随机观察10个视野，每个视野计数100个细胞中的阳性细胞数。阳性细胞数占癌细胞数的10%以上为阳性，阳性细胞数低于癌细胞总数的10%或癌细胞全部不着色为阴性。
CD44蛋白阳性表达于细胞膜和细胞浆，表现为细胞膜和细胞浆内有棕黄色颗粒。显微镜下盲法阅片，显微镜400×高倍镜下随机观察10个视野，每个视野计数100个细胞中的阳性细胞数。未见阳性细胞为(-)，阳性细胞数0%-5%(+)，5%-25%(++)，>25%(+++)。
1.4 统计学处理 采用SPSSl1.5统计软件进行统计分析,χ2检验及求Spearman相关系数.
2 结果
2.1 CD133及CD44在不同卵巢组织中的表达 (表1、2、)
CD133及CD44在正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤及卵巢癌细胞胞膜和胞浆中表达阳性(图1，2)，二者阳性表达率在正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤及卵巢癌三组间呈增高趋势，组间差异性有统计学意义(χ2=11.720,P<0.05；χ2=13.508,P<0.05)。
表1 CD133在不同卵巢组织中的表达
表2 CD44在不同卵巢组织中的表达
2.2 CD133及CD44蛋白表达与卵巢癌临床病理特征的关系及其表达的相关性(表3、4)
CD133及CD44表达水平与卵巢癌的分期、病理分级及淋巴结转移相关(P<0.05)，而与年龄及组织类型无关。Spearman相关性分析显示CD133表达与CD44的表达呈正相关(P<0.05)。
表3 CD133及CD44蛋白与临床病理特征的关系
表4 CD133及CD44蛋白表达的相关性
3 讨论
CD133属于Prominin家族成员,最早发现表达于造血干细胞/祖细胞和神经上皮干细胞表面，以及在各类原始细胞如间质干细胞、内皮祖细胞等细胞中特异性表达，并作为干细胞的标志物分离鉴定多种组织干细胞。一些学者研究发现，某些肿瘤细胞中有CD133+细胞，这种细胞只占肿瘤细胞的极少部分，但具有自我更新、自我分化、自我增殖能力，故认为CD133+肿瘤干细胞主宰了肿瘤的恶性表型和浸润能力。Singh[1]分析脑膜胶质瘤中CD133表达情况， CD133+细胞在3.5-46.3%之间，在相同条件下分别对CD133+、CD133-细胞进行培养，培养中CD133+细胞呈瘤球样悬浮生长，且能继续增殖，而CD133-不能增殖和形成瘤球。据此认为人脑肿瘤中的CD133+细胞就是肿瘤干细胞。此外,O’Brienet al[2]用流式细胞仪纯化结肠癌组织中的CD133阳性细胞,并把他移植到小鼠肾被膜下使其形成肿瘤,结果提示CD133可能为结肠癌干细胞的标志物. 李亚卓[3]等研究发现胃癌组织中的CD133阳性细胞越多其分化越差、浸润越深、分期越晚,同时淋巴结转移数目越多,提示肿瘤组织中CD133阳性细胞越多,含有的癌干样细胞就越多.本研究发现CD133在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤及卵巢癌组织中阳性表达率呈增高趋势,且组间差异有统计学意义。提示CD133的表达与卵巢癌的发生有明确的关系，同时CD133表达水平与卵巢癌的分期、病理分级及淋巴结转移相关.
近年研究发现CD44的高表达与多种人体恶性肿瘤的发生发展和侵袭转移有关。Patrawala L[4]等研究发现，CD44阳性的前列腺癌细胞与CD44阴性的前列腺癌细胞比较，具有更强的增殖能力、克隆形成能力、致瘤能力及转移能力，其致瘤性较CD44阴性细胞强100倍。在乳腺癌[5]、口腔癌[6]和肾细胞癌[7]等恶性肿瘤中CD44蛋白阳性表达的癌细胞比阴性的有更强的侵袭转移能力，说明CD44蛋白的阳性表达在癌细胞的发生发展及肿瘤的侵袭转移方面起到重要的作用。CD44的黏附性在癌细胞的侵袭转移中起到的双重作用有关：一方面由于同质型黏附作用减弱，使肿瘤细胞从同质黏附的原发灶脱离；另一方面由于异质型黏附作用增强，肿瘤细胞借助黏附而移动和转移。卵巢癌具有癌细胞可以从癌体脱落，进入腹水，继而在腹膜、网膜、肠浆膜表面广泛种植转移等特点，因此它与细胞黏附分子的关系近年来倍受重视，尤其是CD44蛋白与卵巢癌的关系最为密切。
本研究结果显示CD44在正常卵巢上皮组织几乎没有表达，在卵巢上皮细胞瘤及卵巢上皮细胞癌中的阳性表达率分别为11.1%、47.8%。在卵巢上皮细胞瘤和卵巢上皮细胞癌中CD44的阳性表达率明显高于正常卵巢上皮组织(P<0.05)，在卵巢上皮性癌高分化组织中的阳性表达率为18.8%，在中分化组织中的阳性表达率为60%，在低分化组织中的阳性表达率为70%，阳性表达率逐渐增高，其阳性表达与卵巢上皮性癌的组织分化程度有关(P<0.05)。本实验的研究结果说明卵巢上皮性癌中CD44的高表达赋予癌细胞较强的侵袭转移能力,可以作为预测卵巢上皮性癌侵袭转移的一个有效的指标。相关性分析发现卵巢癌中CD133表达与CD44的表达呈正相关，但二者之间具体调控机制尚需进一步研究。
参考文献：
[1] Singh S K, Hawkins C, ID, et al.Identification of human brain tumour initiating cell[J]..Nature,2004,432(7015):396- 401
[2] O’Brien CA,Pollett A,Gallinger S,Dick JE.A human colon cancer cell capable of initiating tumour growth in immunodeficientmice[J].Nat ure.2 007;445:106- 110
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[4]Patrawala L, Calhoun T, Sehneider Broussard R ,et al. Highly purified CD44+ prostate caneer cells from xenograft human tumors are enriehed intumorigenic and metastatic progenitor cells[J]. Oneogene. 2006, 25(12):1696- 1708.
[5] DACH M E, CHAR CHANTIA, BR ASOULIS E, et al Immunohisto chemical expression of extracellu larmatrix components tenascin, fibronectin, collagen type IV and lamin in breast cancer their prognostic value and role in tumour invasion and progression [J]. Eur J Cancer, 2002, 38(18): 2362- 2370.
[6] LM S D, YOUNG A N, PANER G P, et al. Prognostic role of CD44 cell adhesion molecule expression in primary and metastatic renal cell carcinoma a clinicopathologic study of 125 cases [J].Virchows Arch, 2008, 452(1): 49- 55
[7]KOSUNEN A, PIR INEN R , R OPPONEN K, et al CD44 expression and its relationship with MMP- 9, clinicopathological factors and survival in oral squamous cell carcinoma[J]. Oral Onco, 2007, 43(1): 51- 59., 百拇医药(李会珍 李伟伟 李蒙)
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