PTEN基因转染兔抑制血管再狭窄的实验研究(2)
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本实验采用PTEN基因真核质粒干预兔腹主动脉球囊损伤模型，观察其对损伤血管增殖内膜的作用及其对血管平滑肌细胞的影响，探讨PTEN基因对血管损伤后再狭窄的调控作用及其作用机制。
1 材料和方法
1.1 材料
1.11 实验动物 清洁级雄性健康日本长毛大白兔40只，平均体重2.0-2.5kg，由吉林大学白求恩医学部实验动物中心提供。
1.12主要试剂 pcDNA3-PTEN质粒由中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所田梅博士馈赠。阳离子脂质体Dosper 为Boehringer Mannheim 公司产品；药物球囊导管和附件cordis公司；即用型SP免疫组化染色试剂盒 北京中山生物技术有限公司；兔PCNA单克隆抗体、羊抗兔MMP-2及TIMP-2多克隆抗体 武汉博士德生物工程公司。
1.2 方法
1.2.1 动物分组 40只大白兔随机分为4 组，每组10只。对照组：正常腹主动脉；模型组：单纯行内膜剥脱术；PTEN组：内膜剥脱术+PTEN真核质粒；空载体组：内膜剥脱术+空脂质体。
1.2.2构建携带PTEN的阳离子脂质体载体 通过定向克隆与同源重组,构建携带有野生型Dos-PTEN,该载体同时携带myc-His六聚组氨酸,可借助其表达进行追踪目的基因导入与表达情况;同时扩增仅含有示踪基因的空脂质体(Dos-myc-His)作为阳性对照。
1.2.3 动脉损伤模型建立及转染 方法简述如下：插4F药物球囊导管至腹主动脉中段，约1.5 cm，以200 kPa充盈球囊，然后慢速回拉导管平切口处，重复上述过程3次。之后模型组用生理盐水、PTEN组用阳性脂质体转染液、空载体组用空脂质体(Dos-myc-His )各120 ul在球囊空隙间浸润30min，退出导管，结扎右侧股动脉，术后青霉素预防感染。3组分别于球囊损伤后4周取材。
1.2.4 4周后切下扩张段 1 厘米石蜡包埋，以5um厚度切片 ......
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