白细胞介素24抑制人宫颈癌细胞增殖的机制研究(2)
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参见附件。
1.2 方法。
1.2.1 细胞培养 人宫颈癌细胞HeLa于含100mL /L 小牛血清的RPM I1640 培养基中, 37℃, 50mL /L CO2 条件下培养。
1.2.2 Ad5F35-IL24及Ad5F35-EGFP转染宫颈癌
用PBS和Ad5F35-EGFP作空白和阴性对照，转染时间都在细胞传代后6 h，细胞贴壁生长后加入病毒感染液，继续孵育2 h后弃去病毒感染液，接着加入新鲜培养基继续培养。在培养的第3天用western blot检测IL-24蛋白在细胞中的表达。
1.2.3 MTT法检测病毒滴度与细胞存活的关系
将常规培养48 h呈指数生长期的宫颈癌细胞，制成单细胞悬液，计数并调整细胞浓度为2.0×105ml，以100μl/孔接种于96 孔板，培养6 h，当细胞贴壁生长后，吸去培养液，分别加入PBS、含Ad5F35-IL24分别为105PFU/ml、5×105PFU/ml、106PFU/ml、2×106PFU/ml、5×106PFU/ml、107PFU/ml的PBS各100μl继续孵育2 h后弃去病毒感染液，加入新鲜培养基，继续培养72 h后加入MTT(5 mg/ml)20 μl，接着再培养4 h，随后测定560 nm波长下各孔的吸光度(A)值，最后以抑制率为纵坐标，以时间(d)为横坐标绘制生长抑制曲线图，并按以下公式计算抑制率。抑制率(%)=(空白对照组A值-实验组A值)/空白对照组A值×100%。实验均重复3 次。
1.2.4 台盼蓝染色绘制细胞生长曲线
将常规培养72 h呈指数生长期的宫颈癌细胞 ......
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