β2微球蛋白的全自动生化分析仪测定法(1)
【摘要】目的：评价全自动生化分析仪测定β2微球蛋白(β2 MG)的方法。方法：采用日常病人混合血清为标本，进行线性测定、精密度测定、回收实验、干扰实验等方法学评价实验。结果：全自动生化分析仪测定β2微球蛋白的线性范围为0 mg/L～16 mg/L，批内和批间的SD和CV均小于5%，均匀回收率为98.7%；胆红素含量在497 μmol/L内无干扰。结论：全自动生化分析仪进行β2微球蛋白的测定，适用于临床。
【关键词】β2微球蛋白；混合血清；全自动生化分析仪；线性范围
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2012)11-0338-01
β_2-微球蛋白(β2MG在多种系统疾病中都有不同程度的变化，今年来，因其与人类白细胞抗原有密切关系，而引起免疫学家的广泛重视 β2微球蛋白(β2MG)是一种分子量为11 800的低分子量蛋白，所有有核细胞都能产生。它存在于有核细胞的细胞膜上，是细胞中完整HLA分子的一部分。在正常生理条件下，体液中含量甚微。其主要生理作用为参与识别异己物质和提供杀伤细胞受体的作用。正常人体逐日产生100 mg—200 mg β2 MG，其血中浓度相当稳定，约为2 mg/L。测定体液中的β2 MG，对一些疾病的筛选、诊断、疗效观察和预后评价有一定的意义[1]。
, http://www.100md.com
本法采用β2MG免疫透射比浊试剂盒在日立7600全自动生化分析仪开展β2MG的测定，对这种方法进行了初步的评价，并进一步对实验的参数等进行了探讨。
1 材料与方法
1.1 标本 选取病人的日常检测血清标本，无溶血，无黄疸。
1.2 仪器 日本日立7600全自动生化分析仪
1.3 (β_2MG药盒由中国原子能科学研究院提供，用放射免疫测定，FT3、FT4药盒由中国原子能科学研究院提供同位素研究所提供，严格按照说明书操作，质量控制符合科学要求。
1.4 统计方法：结果以均值标准差表示，组间比较采用两样本间t检验，相关性采用直线相关分析。
2 原理与方法
, 百拇医药
2.1 原理 β2MG与包被在胶乳颗粒上的抗人β2MG抗体结合产生浊度，其浊度与β2MG浓度成正比，可用比浊法测定。
2.2 方法 上机测定参数：样品用量为3 μl，试剂Ⅰ用量为270 μl，试剂Ⅱ用量为30 μl，方法为两点终点法，主波长540 nm，副波长660 nm，反应为正反应，第一点读数18点，终点读数34点，温度为37 ℃。试剂盒提供的标准浓度为10 mg/L左右(以每盒所给标准浓度为准)。
3 实验与结果
3.1 线性测定 取β2MG为20 mg/L左右的无溶血、无黄疸的新鲜血清做1∶(1～7)倍稀释，上机测定，结果见表1，图1。
表1 β2MG浓度mg/L与吸光度差的关系(略)
图1 β2MG线性图(略)
, http://www.100md.com
3.2 精密度测定 取无溶血、无黄疸混合血清分装20管，于-20 ℃保存备用。批内精密度，连续测定20次，结果：χ2=3.43 mg/L，SD=0.048，CV(%)=1.4%。批间精密度，连续测定20 d，结果：χ2=3.42 mg/L，SD=0.069，CV(%)=2.0%。
3.3 回收实验 取一混合血清(β2MG含量为1.95 mg/L)，分成三管每管0.45 ml，三管分别加进含量为10.6 mg/L、5.3 mg/L、2.65 mg/L的标准液0.05 ml测定，计算回收率分别为97.3%、99.0%、99.7%，均匀回收率98.7%。
3.4 干扰实验 取一无溶血、无黄疸混合血清(β2MG含量为3.46 mg/L)0.5 ml，加进胆红素含量为497 μmol/L 的样品0.05 ml进行测定。测得β2MG值为3.47 mg/L，可见胆红素含量在497 μmol/L下无明显干扰。
, 百拇医药
3.5 结果表明，在血清β2MG含量为16 mg/L内线性良好，因此我们在实际测定中设置16 mg/L为测定上限，结果超过16 mg/L的样本，设定仪器自动稀释重做，以保证结果的正确性。
3.6 参考值 随机取正常体检血清70份，测定其β2MG含量为：χ2=1.069 mg/L，SD=0.298，CV(%)=27.9%。
4 讨论
测定β2MG的方法有免疫酶标法、放射免疫法、放射比浊法、免疫比浊法。免疫酶标法重复性差，适合大批量检测。放射免疫法和放射比浊法由于核素有半衰期，试剂有效期短；此外核素有放射污染、而且核素实验室的建设须经防疫部分的监视，操纵职员亦须经过特殊练习，不易普及，在测定时还需要昂贵的免疫测定仪。本法采用β2MG免疫透射比浊试剂盒在日立7600全自动生化分析仪上开展β2MG的测定，不需要另外的设备，适合于批量和单个测定，无放射污染，结果稳定性、重复性满足临床要求。免疫比浊法测定MG由于使用抗人β2MG抗体，有很高的特异性，且方法简单、快速，可以在日立7600上使用。
, http://www.100md.com
免疫比浊法有以上优点，但也有一定缺点，尤其在抗原、抗体比例不同时，如出现前带或后带现象，对测定结果有较大的影响，故试剂Ⅰ、Ⅱ的量是经过多次试验得出。此外，在高血脂存在的情况下，脂蛋白的小颗粒可形成浊度，使测定值假性升高，因此测定时尽量不用脂血标本。
β2-微球蛋白(β_2-M)是体内有核细胞包括淋巴细胞产生的一种低分子量(11800)球蛋白。正常以极微量存在于血清和体液中。1968年由瑞典Berggard[2]首先发现β2MG至今，β2MG的应用越来越广泛。在某些疾病中，血清中免疫球蛋白含量显著高于正常值，如多发性骨髓瘤、慢性活动性肝炎等；或显著低于正常值，如先天性低免疫球蛋白血症、某些肠道病等，肺癌、肝癌、鼻咽癌、白血病患者MG明显升高[2～4]。要作出确诊，必须合病人的病史、症状、临床检查和其他实验室检查资料。, http://www.100md.com(李娟华 刘淑萍)
【关键词】β2微球蛋白；混合血清；全自动生化分析仪；线性范围
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2012)11-0338-01
β_2-微球蛋白(β2MG在多种系统疾病中都有不同程度的变化，今年来，因其与人类白细胞抗原有密切关系，而引起免疫学家的广泛重视 β2微球蛋白(β2MG)是一种分子量为11 800的低分子量蛋白，所有有核细胞都能产生。它存在于有核细胞的细胞膜上，是细胞中完整HLA分子的一部分。在正常生理条件下，体液中含量甚微。其主要生理作用为参与识别异己物质和提供杀伤细胞受体的作用。正常人体逐日产生100 mg—200 mg β2 MG，其血中浓度相当稳定，约为2 mg/L。测定体液中的β2 MG，对一些疾病的筛选、诊断、疗效观察和预后评价有一定的意义[1]。
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本法采用β2MG免疫透射比浊试剂盒在日立7600全自动生化分析仪开展β2MG的测定，对这种方法进行了初步的评价，并进一步对实验的参数等进行了探讨。
1 材料与方法
1.1 标本 选取病人的日常检测血清标本，无溶血，无黄疸。
1.2 仪器 日本日立7600全自动生化分析仪
1.3 (β_2MG药盒由中国原子能科学研究院提供，用放射免疫测定，FT3、FT4药盒由中国原子能科学研究院提供同位素研究所提供，严格按照说明书操作，质量控制符合科学要求。
1.4 统计方法：结果以均值标准差表示，组间比较采用两样本间t检验，相关性采用直线相关分析。
2 原理与方法
, 百拇医药
2.1 原理 β2MG与包被在胶乳颗粒上的抗人β2MG抗体结合产生浊度，其浊度与β2MG浓度成正比，可用比浊法测定。
2.2 方法 上机测定参数：样品用量为3 μl，试剂Ⅰ用量为270 μl，试剂Ⅱ用量为30 μl，方法为两点终点法，主波长540 nm，副波长660 nm，反应为正反应，第一点读数18点，终点读数34点，温度为37 ℃。试剂盒提供的标准浓度为10 mg/L左右(以每盒所给标准浓度为准)。
3 实验与结果
3.1 线性测定 取β2MG为20 mg/L左右的无溶血、无黄疸的新鲜血清做1∶(1～7)倍稀释，上机测定，结果见表1，图1。
表1 β2MG浓度mg/L与吸光度差的关系(略)
图1 β2MG线性图(略)
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3.2 精密度测定 取无溶血、无黄疸混合血清分装20管，于-20 ℃保存备用。批内精密度，连续测定20次，结果：χ2=3.43 mg/L，SD=0.048，CV(%)=1.4%。批间精密度，连续测定20 d，结果：χ2=3.42 mg/L，SD=0.069，CV(%)=2.0%。
3.3 回收实验 取一混合血清(β2MG含量为1.95 mg/L)，分成三管每管0.45 ml，三管分别加进含量为10.6 mg/L、5.3 mg/L、2.65 mg/L的标准液0.05 ml测定，计算回收率分别为97.3%、99.0%、99.7%，均匀回收率98.7%。
3.4 干扰实验 取一无溶血、无黄疸混合血清(β2MG含量为3.46 mg/L)0.5 ml，加进胆红素含量为497 μmol/L 的样品0.05 ml进行测定。测得β2MG值为3.47 mg/L，可见胆红素含量在497 μmol/L下无明显干扰。
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3.5 结果表明，在血清β2MG含量为16 mg/L内线性良好，因此我们在实际测定中设置16 mg/L为测定上限，结果超过16 mg/L的样本，设定仪器自动稀释重做，以保证结果的正确性。
3.6 参考值 随机取正常体检血清70份，测定其β2MG含量为：χ2=1.069 mg/L，SD=0.298，CV(%)=27.9%。
4 讨论
测定β2MG的方法有免疫酶标法、放射免疫法、放射比浊法、免疫比浊法。免疫酶标法重复性差，适合大批量检测。放射免疫法和放射比浊法由于核素有半衰期，试剂有效期短；此外核素有放射污染、而且核素实验室的建设须经防疫部分的监视，操纵职员亦须经过特殊练习，不易普及，在测定时还需要昂贵的免疫测定仪。本法采用β2MG免疫透射比浊试剂盒在日立7600全自动生化分析仪上开展β2MG的测定，不需要另外的设备，适合于批量和单个测定，无放射污染，结果稳定性、重复性满足临床要求。免疫比浊法测定MG由于使用抗人β2MG抗体，有很高的特异性，且方法简单、快速，可以在日立7600上使用。
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免疫比浊法有以上优点，但也有一定缺点，尤其在抗原、抗体比例不同时，如出现前带或后带现象，对测定结果有较大的影响，故试剂Ⅰ、Ⅱ的量是经过多次试验得出。此外，在高血脂存在的情况下，脂蛋白的小颗粒可形成浊度，使测定值假性升高，因此测定时尽量不用脂血标本。
β2-微球蛋白(β_2-M)是体内有核细胞包括淋巴细胞产生的一种低分子量(11800)球蛋白。正常以极微量存在于血清和体液中。1968年由瑞典Berggard[2]首先发现β2MG至今，β2MG的应用越来越广泛。在某些疾病中，血清中免疫球蛋白含量显著高于正常值，如多发性骨髓瘤、慢性活动性肝炎等；或显著低于正常值，如先天性低免疫球蛋白血症、某些肠道病等，肺癌、肝癌、鼻咽癌、白血病患者MG明显升高[2～4]。要作出确诊，必须合病人的病史、症状、临床检查和其他实验室检查资料。, http://www.100md.com(李娟华 刘淑萍)