雌二醇及其受体抑制剂对人卵巢癌SKOV3细胞体外生长的影响(3)
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参见附件。
4)加入MTT：在每一时间点取样前，避光加入5mg/ml的MTT液20ul， 培养箱中继续培养4h。
5)酶标仪测OD值：终止培养，轻轻弃去上清，每孔加入150ul二甲基亚砜(DMSO)，微量振荡器振荡8min，结晶充分溶解后酶标仪测定每孔490nm的吸光值(OD490)，重复实验3次。
6)细胞增殖抑制率的计算：抑制率=(对照组OD值-实验组OD值)/对照组OD值*100%【11】。
3.流式细胞术检测细胞凋亡率
1)单细胞悬液的制备同上，并调整细胞浓度为1×105个/ml。
2)铺板：将上述单细胞悬液按每孔2ml接种于6孔板。置于37℃、5%CO2培养箱中孵育。
3)加药：细胞贴壁后，弃原培养液，依次加入2ml终浓度分别为lO-7mol/L、lO-9mol/L、lO-11mol/L的E2及(E2+ICI 182 780)，置于培养箱中继续培养24及48小时，每个浓度每个时间点设4个平行孔；同时设阴性对照组即细胞对照组。
4)流式细胞仪检测细胞凋亡：取出6孔板，胰酶消化收集细胞(为更准确测得凋亡细胞，原培养液不丢弃)，置于离心管中，离心(2000rpm，5min)，加入500μl Annexin V Binding Buffer；再加入5μl的Annexin V—FITc 混匀后，加入5μl的Propidium Iodide，混匀；避光室温反应10分钟，流式细胞仪检测细胞凋亡的情况。(Ex=488nm，Em=530nm)
(四) 统计方法：
所得数据采用均数±标准差(±s)表示 ......
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