HPV18型病毒绝对定量检测方法的建立(2)
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参见附件。
HPV DNA 整合入宿主基因组被认为发生于宫颈癌发展的早期阶段,也是宫颈病变恶性转化的重要因素[7]。在整合过程中,HPV E2和L1基因片段断裂或丢失,癌基因E6/7或E7片段整合入宿主基因组脆性部位的到稳定表达,并引起细胞特定基因功能紊乱,或激活或下调,这一机制已成为高危型HPV相关恶性肿瘤发病机制的一个主要诱因。据研究发现,高危型HPV16、18和58型在宫颈癌和食管癌中的整合率较高[4],因此我们本次选用HPV18E6/7基因作为PCR扩增的靶基因能大大提高检测的灵敏性。为进一步探明HPV18在宫颈癌中的感染病毒含量,本研究首先通过构建HPV18型E6/7的标准品,采用实时定量PCR法绘制标准曲线,通过换算建立HPV18型的感染量的预测模型,为研究妇女宫颈癌中HPV18的感染状态提供了可靠的方法。我们发现HPV18 E6/7标准曲线相关系数及相关性均较好,说明构建质粒可以作为标准品应用于病毒含量和整合的检测。
虽然,目前对于高危HPV的病毒负载量,整合状态与宫颈癌及癌前病变的严重程度之间的关系,以及HPV与宿主基因组的整合是否为宫颈癌病变的必要因素仍有部分争议。甚至有学者因此认为在高危型HPV,特别是HPV16型导致的宫颈癌发生发展过程中 HPV 整合并非一个至关重要的因素 ......
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