以同源异形盒家族HOXC6基因为靶标荧光PCR鉴定地沟油的方法研究(2)
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2.2 靶标基因及目标扩增片段的筛选结果
按照上述筛选方法，通过与深圳华大基因公司的千种植物基因组数据库比对，本研究确定HOXC6基因(Genbank NW 153693)639-904bp之间的片段与千种植物基因不相匹配，并根据此段基因采用Primer 5软件 设计引物和探针，最终确定上游引物为5’-CTCGACTCCCTTTTATTC-3’，下游引物为5’-CTGTGTGTTATGTCCTAAG -3’，探针5’ AATGTCGTGTTCAGTTCCAGCC 3’，报告基团FAM490，淬灭基团Eclipse，扩增142bp的目标片段，如图1所示。
图1 HOXC6基因639-904bp段及目标扩增片段
2.3 目标扩增片段特异性验证
本研究选取牛、羊、猪、马、鸡、鸭、鱼7种动物的肌肉组织和芝麻、葵花籽、油菜籽、花生、油棕、棉籽、玉米、大豆、小麦、大米、辣椒11种植物组织，提取基因组DNA，荧光PCR扩增HOXC6基因目标片段。扩增结果显示哺乳动物样品Ct值小于21，鸡、鸭、鱼等非哺乳动物扩增阴性或Ct值较大；而11种植物组织的HOXC6基因目标片段的扩增结果全部为阴性(见表1)，实时扩增曲线见图2和图3。
2.4 地沟油和食用植物油鉴定结果
针对DG01-DG06号地沟油样品和ZC01-ZC08食用植物油样品的HOXC6基因目标片段扩增结果显示6个地沟油样品全部检出目标核酸片段，而正常植物油样品扩增结果全部为阴性(见表2)，实时扩增曲线见图4和图5。
3 讨论
同源异型盒基因(homeobox genes ......
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