HIF—1α、VDGF—C在宫颈鳞癌组织中的表达及意义
【摘 要】目的：探讨HIF-1α、VDGF-C在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义。方法：运用免疫组化S-P法检测HIF-1α、VDGF-C在145例宫颈鳞癌组织、16例宫颈CIN组织、16例正常宫颈组织中的表达。结果：HIF-1α、VDGF-C在宫颈鳞癌组织中的表达阳性率分别为82.1%(119/145)、86.2%(125/145)；在CIN组织中分别为37.5%(6/16)、31.3%(5/16)；在正常宫颈组织中分别为6.3%(1/16)、12.5%(2/16)。宫颈鳞癌组织中HIF-1α、VDGF-C的表达均与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)，均与患者年龄、肿块大小无关(P>0.05)。两蛋白阳性表达呈正相关(r=0.398，P<0.01)。随访5年的107例患者中HIF-1α、VDGF-C阳性患者5年生存率均低于HIF-1α、VDGF-C阴性患者。结论：HIF-1α、VDGF-C的高表达参与宫颈鳞癌的发生发展，并且两蛋白具有协同作用，检测两蛋白的表达情况可作为临床肿瘤生物学行为和患者预后判断的参考指标。
【关键词】HIF-1α；VDGF-C；宫颈鳞癌；判断预后
在世界范围内，子宫颈癌是女性第二位常见的恶性肿瘤，其中以鳞状细胞癌为主。低氧诱导因子-1α(HIF-1α)是介导肿瘤细胞缺氧适应的关键性转录调控因子，与肿瘤的增殖、浸润密切相关。血管内皮生长因子-C(VDGF-C)是特异性的淋巴管内皮细胞生长因子，与肿瘤的生长、转移有关。本研究采用免疫组化S-P法检测HIF-1α、VDGF-C在宫颈鳞癌组织、癌前组织及正常宫颈组织中的表达，结合临床资料探讨其关系及临床病理意义。
1 材料与方法
1.1 材料 选用2005年7月～2012年7月在我院收治的宫颈鳞癌、CIN等患者，实验标本分为3组。①正常组：正常宫颈组织15例，平均年龄45.4岁；②宫颈CIN组：15例，平均年龄42.5岁；③鳞癌组：鳞癌150例，平均年龄54.2岁。按国际妇产科联盟(FIGO)2009年宫颈癌临床分期标准，临床早期83例，临床晚期67例，有淋巴结转移65例，无淋巴结转移85例。所有病例临床、病理资料完整，患者术前均未进行过抗肿瘤治疗。术后随访资料完整107例，随访时间12～66个月，中位随访时间25个月，死亡6例。
1.2 免疫组化染色 采用S-P法，HIF-1α抗体、VDGF-C抗体、通用型S-P试剂盒及DAB显色试剂盒均购自上海长岛生物技术有限公司，染色方法及步骤按说明书进行，用PBS代替一抗作为阴性对照，已知阳性切片作为阳性对照。
1.3 结果判读 细胞浆或细胞核见到清晰的棕褐色颗粒者为阳性细胞。每例标本观察5个高倍视野，通过综合染色强度指数均值进行半定量分析。
1.4 统计学分析 用SPSSl6.0统计分析软件进行分析，组间差异比较采用x?检验，两分类变量之间的关联性分析采用Pearson列联系数度量，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HIF-1α的表达 HIF-1α在鳞癌组、宫颈CIN组及正常组阳性表达率为82.1%(119/145)、37.5%(6/16)、6.3%(1/16)。HIF-1α蛋白阳性表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和肿瘤临床分期有密切相关(均P<0.05)，低分化组表达高于高、中分化组(x?=6.74，P<0.01)；有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(x?=16.65，P<0.01)，临床分期晚期高于临床分期早期(x?=10.12，P<0.01)，与患者年龄、肿块大小无关(P>0.05)。
2.2 VDGF-C的表达 VDGF-C在鳞癌组、宫颈CIN组及正常组阳性表达率为86.2%(125/145)、31.3%(5/16)、12.5%(2/16)。VDGF-C的表达在有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(x?=15.25，P<0.01)，在临床晚期的表达高于I临床早期 (x?=12.95，P<0.01)，与患者年龄、肿块大小及分化程度无关(P>0.05)。
2.3 HIF-1α、VDGF-C表达的相关性分析 结果显示，HIF-1α、VDGF-C在宫颈鳞癌组织中阳性表达呈正相关(r0.398，P<0.01)。
2.4 HIF-1α、VDGF-C的表达与病人预后关系 术后随访完整资料107例，HIF-1α阳性病人5年生存率14%，明显低于HIF-1α阴性病人的27%。VEGF-C阳性病人5年生存率12%，明显低于VEGF-C阴性病人的31%。
3 讨论
宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，尽管临床上采用宫颈刮片、液基细胞涂片、HPVDNA检测、阴道镜等多种检测手段进行宫颈癌的早期检测，对早期宫颈癌的排查起了一定作用，大大提高了宫颈癌的早期检出率。但由于女性对恶性肿瘤缺乏有效的认识和监控手段，仍有许多患者死于复发和转移。
HIF-1α可调节多种靶基因的表达。对维持肿瘤细胞的能量代谢、促进新血管生成及肿瘤增殖和转移起重要作用，且受多种癌基因的调控。HIF-1α可以引起新的血管形成，使肿瘤细胞适应乏氧微环境，而得以持续生长和扩散转移。本研究结果显示，HIF-1α在宫颈鳞癌组织中表达升高，明显高于宫颈CIN及正常宫颈组织，其阳性表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和肿瘤临床分期有密切相关，有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组，临床分期晚期组高于临床分期早期组，HIF-1α的表达与淋巴结转移和肿瘤临床分期密切相关。
VDGF-C是一种分泌性多肽，又称淋巴管生长因子，是血管内皮生长因子家族成员，研究报道认为其可促进淋巴管生长，与肿瘤细胞增殖及向区域淋巴结转移、抑制肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤细胞侵袭能力有关。VDGF-C可诱导实体瘤组织内或肿瘤组织周的淋巴管生成及充盈扩张，促进恶性肿瘤细胞进行淋巴道转移。本组实验结果显示，VDGF-C在肿瘤组织表达升高，在有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组，临床晚期组的表达高于临床早期组，VDGF-C的表达与淋巴结转移、临床分期密切相关。
结果还显示HIF-1α、VDGF-C在宫颈鳞癌组织中的表达呈正相关；术后随访资料表明，HIF-1α、VDGF-C高表达患者术后生存率低于其低表达组。这些研究结果表明，HIF-1α、VDGF-C的高表达在宫颈鳞癌的增殖过程中及其对患者预后有着重要的作用。
综上所述，HIF-1α、VDGF-C蛋白在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达升高与鳞癌的发生、浸润及转移过程密切相关，HIF-1α、VDGF-C表达升高提示患者临床预后不良，可作为中老年宫颈鳞癌病人判断预后及生物学行为的参考指标。
参考文献：
[1] 林伍梅，李艳芳，刘富元 .Ⅰ b～Ⅱ a期宫颈癌组织中HIF-1α、VEGF的表达变化及其与MVD的关系。山东医药， 2010年 50卷 第42期 。
[2] 邹亮，高慧淳，周建洪，等.HIF-1α、VDGF-C在细支气管肺泡癌中的表达及其意义[J].中国癌症防治杂志，2011，3(4)：306—309., 百拇医药(韩国庆)
【关键词】HIF-1α；VDGF-C；宫颈鳞癌；判断预后
在世界范围内，子宫颈癌是女性第二位常见的恶性肿瘤，其中以鳞状细胞癌为主。低氧诱导因子-1α(HIF-1α)是介导肿瘤细胞缺氧适应的关键性转录调控因子，与肿瘤的增殖、浸润密切相关。血管内皮生长因子-C(VDGF-C)是特异性的淋巴管内皮细胞生长因子，与肿瘤的生长、转移有关。本研究采用免疫组化S-P法检测HIF-1α、VDGF-C在宫颈鳞癌组织、癌前组织及正常宫颈组织中的表达，结合临床资料探讨其关系及临床病理意义。
1 材料与方法
1.1 材料 选用2005年7月～2012年7月在我院收治的宫颈鳞癌、CIN等患者，实验标本分为3组。①正常组：正常宫颈组织15例，平均年龄45.4岁；②宫颈CIN组：15例，平均年龄42.5岁；③鳞癌组：鳞癌150例，平均年龄54.2岁。按国际妇产科联盟(FIGO)2009年宫颈癌临床分期标准，临床早期83例，临床晚期67例，有淋巴结转移65例，无淋巴结转移85例。所有病例临床、病理资料完整，患者术前均未进行过抗肿瘤治疗。术后随访资料完整107例，随访时间12～66个月，中位随访时间25个月，死亡6例。
1.2 免疫组化染色 采用S-P法，HIF-1α抗体、VDGF-C抗体、通用型S-P试剂盒及DAB显色试剂盒均购自上海长岛生物技术有限公司，染色方法及步骤按说明书进行，用PBS代替一抗作为阴性对照，已知阳性切片作为阳性对照。
1.3 结果判读 细胞浆或细胞核见到清晰的棕褐色颗粒者为阳性细胞。每例标本观察5个高倍视野，通过综合染色强度指数均值进行半定量分析。
1.4 统计学分析 用SPSSl6.0统计分析软件进行分析，组间差异比较采用x?检验，两分类变量之间的关联性分析采用Pearson列联系数度量，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HIF-1α的表达 HIF-1α在鳞癌组、宫颈CIN组及正常组阳性表达率为82.1%(119/145)、37.5%(6/16)、6.3%(1/16)。HIF-1α蛋白阳性表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和肿瘤临床分期有密切相关(均P<0.05)，低分化组表达高于高、中分化组(x?=6.74，P<0.01)；有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(x?=16.65，P<0.01)，临床分期晚期高于临床分期早期(x?=10.12，P<0.01)，与患者年龄、肿块大小无关(P>0.05)。
2.2 VDGF-C的表达 VDGF-C在鳞癌组、宫颈CIN组及正常组阳性表达率为86.2%(125/145)、31.3%(5/16)、12.5%(2/16)。VDGF-C的表达在有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(x?=15.25，P<0.01)，在临床晚期的表达高于I临床早期 (x?=12.95，P<0.01)，与患者年龄、肿块大小及分化程度无关(P>0.05)。
2.3 HIF-1α、VDGF-C表达的相关性分析 结果显示，HIF-1α、VDGF-C在宫颈鳞癌组织中阳性表达呈正相关(r0.398，P<0.01)。
2.4 HIF-1α、VDGF-C的表达与病人预后关系 术后随访完整资料107例，HIF-1α阳性病人5年生存率14%，明显低于HIF-1α阴性病人的27%。VEGF-C阳性病人5年生存率12%，明显低于VEGF-C阴性病人的31%。
3 讨论
宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，尽管临床上采用宫颈刮片、液基细胞涂片、HPVDNA检测、阴道镜等多种检测手段进行宫颈癌的早期检测，对早期宫颈癌的排查起了一定作用，大大提高了宫颈癌的早期检出率。但由于女性对恶性肿瘤缺乏有效的认识和监控手段，仍有许多患者死于复发和转移。
HIF-1α可调节多种靶基因的表达。对维持肿瘤细胞的能量代谢、促进新血管生成及肿瘤增殖和转移起重要作用，且受多种癌基因的调控。HIF-1α可以引起新的血管形成，使肿瘤细胞适应乏氧微环境，而得以持续生长和扩散转移。本研究结果显示，HIF-1α在宫颈鳞癌组织中表达升高，明显高于宫颈CIN及正常宫颈组织，其阳性表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和肿瘤临床分期有密切相关，有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组，临床分期晚期组高于临床分期早期组，HIF-1α的表达与淋巴结转移和肿瘤临床分期密切相关。
VDGF-C是一种分泌性多肽，又称淋巴管生长因子，是血管内皮生长因子家族成员，研究报道认为其可促进淋巴管生长，与肿瘤细胞增殖及向区域淋巴结转移、抑制肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤细胞侵袭能力有关。VDGF-C可诱导实体瘤组织内或肿瘤组织周的淋巴管生成及充盈扩张，促进恶性肿瘤细胞进行淋巴道转移。本组实验结果显示，VDGF-C在肿瘤组织表达升高，在有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组，临床晚期组的表达高于临床早期组，VDGF-C的表达与淋巴结转移、临床分期密切相关。
结果还显示HIF-1α、VDGF-C在宫颈鳞癌组织中的表达呈正相关；术后随访资料表明，HIF-1α、VDGF-C高表达患者术后生存率低于其低表达组。这些研究结果表明，HIF-1α、VDGF-C的高表达在宫颈鳞癌的增殖过程中及其对患者预后有着重要的作用。
综上所述，HIF-1α、VDGF-C蛋白在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达升高与鳞癌的发生、浸润及转移过程密切相关，HIF-1α、VDGF-C表达升高提示患者临床预后不良，可作为中老年宫颈鳞癌病人判断预后及生物学行为的参考指标。
参考文献：
[1] 林伍梅，李艳芳，刘富元 .Ⅰ b～Ⅱ a期宫颈癌组织中HIF-1α、VEGF的表达变化及其与MVD的关系。山东医药， 2010年 50卷 第42期 。
[2] 邹亮，高慧淳，周建洪，等.HIF-1α、VDGF-C在细支气管肺泡癌中的表达及其意义[J].中国癌症防治杂志，2011，3(4)：306—309., 百拇医药(韩国庆)