不同年龄健康人群肠道微生态的变化
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【文章编号】1004-7484(2014)01-0102-02
在人体，肠道菌群是一个复杂的微生态系统，目前在肠道中细菌已知多达 500 余种，大约1013～1014个，厌氧菌约占98%以上。肠道菌群的种类和数量是相对稳定的， 受饮食、内分泌、卫生习惯、地理环境、年龄及卫生条件的影响而变动。本研究以不同年龄阶段的健康人群为对象，通过常规细菌培养及荧光定量PCR来检测其肠道菌群的数量，进一步研究肠道众多菌群与年龄关系，希望找到长寿老人相关肠道菌群。
1 对象与方法
1.1 对象
共收集健康人群粪便标本81例，其中：少年组26例，男性16例，女性10例，年龄范围8-15岁，平均年龄12.3岁；青壮年人群30例，男性17例，女性13例，年龄范围27-50岁，平均年龄36.7岁； 老年人群25例，男性15例，女性10例，年龄范围65-80岁，平均年龄71.2岁。三组人群采样前无腹泻便秘等胃肠道疾病、肝胆疾病及心脑肾等重要脏器疾病史，4周内未用过微生态活菌制剂(如酸奶)及抗生素。
1.2 方法
1.2.1实验者留取粪便标本于无菌袋中，置入厌氧罐内，立即送检分离，所需时间严格控制在30min之内。
1.2.2目的菌群定性、定量检测方法
常规细菌培养：无菌获取新鲜粪便1g，置稀释液A内，振荡器制匀浆，依次连续10倍稀释到10-8，于不同稀释度取标本液50uL并用“L”棒涂抹于不同培养基上，依据研究目的，对所选目的菌进行定性定量检测。
非选择性培养基：肠道厌氧菌培养基BL、肠道需氧菌培养基；
选择性培养基：双歧杆菌培养基、类杆菌培养基、乳杆菌培养基、肠杆菌培养基、肠球菌培养基、酵母菌培养基。
培养条件：厌氧菌培养采用厌氧盒，于37℃培养48 h～72 h；需氧菌用普通温箱37℃培养48h。
菌种鉴定：厌氧菌三级鉴定法。采用API生化鉴定系统，将细菌鉴定到属水平。检测下限为2×10-1 CFU/g湿便。
荧光定量PCR：粪便总DNA抽提：采用QIAamp? DNA粪便袖珍试剂盒(Qiagen ......
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