福尔马林固定人体肿瘤组织提取DNA的时效性研究
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【摘 要】目的：研究多长时间内经福尔马林固定的标本既保证了组织形态的完好，还不影响DNA的提取。材料和方法：人体新鲜肿瘤组织经福尔马林固定标本12例，长期经福尔马林固定的标本10例，采用传统饱和酚氯仿抽提法提取DNA。结果：新鲜标本在福尔马林固定一周内提取DNA效果好，一周后DNA开始讲解，一个月后无法提取DNA。福尔马林长期固定的标本，经处理后有2例可以提出DNA，提取效果不好。结论：采用福尔马林固定的组织标本提取DNA最好在一周内，能保证DNA质量。
【中图分类号】R734.2 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2014)03-01294-01
随着分子生物学的进展，提取人体肿瘤DNA进行深入研究是常见的实验方法之一。DNA可以从患者血、尿、及肿瘤组织等多种途径获得，但人们更多采用从新鲜肿瘤组织中获得DNA。要想得到新鲜的肿瘤组织，对于不在临床工作的科研工作者来说是比较困难的，途径之一可以天天去医院取标本，这样需要专人往返与单位和医院之间，费时费力；途径之二可以将液氮罐放在医院，但需要定期更换液氮罐，也比较麻烦；因此，为了节省时间和人力，许多研究人员采取福尔马林固定标本，一次性取回标本，但新的问题出现了，从福尔马林固定的组织标本提取DNA存在一定的困难，因为福尔马林会造成DNA降解，导致产量低，影响进一步的研究。有研究显示福尔马林对DNA的降解与固定的时间有关，但是多长时间内经福尔马林固定的标本既保证了组织形态的完好，还不影响DNA的提取，尚缺少具体的实验室数据，就此进行了深入细致的研究。
1材料与方法：
1.1实验材料：从沈阳市沈洲医院和辽宁省肿瘤收集了新鲜肿瘤标本12例，包括子宫肌瘤4例，胃癌4例，大肠癌4例，每例标本体积约3cm3，同一天取材并固定于10%福尔马林溶液中，溶液均没过组织块。另取1998年从中国医科大学收集经福尔马林固定的胃癌标本10例。
1.2 方法：称出标本100mg， 用均浆器均浆，参考Sambroock 等人[1]的方法提取DNA，加入蛋白酶K的量按标准量(100μg/ml)，在56℃水浴3小时，不断轻摇混均，视消化效果可以加入标准量的1/2倍蛋白酶K进行消化，直至将材料完全消化为止，用饱和酚氯仿抽提法提取DNA ......
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