Survivin基因沉默抑制肺腺癌A549细胞增殖并增强其对吉非替尼的敏感性(2)
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参见附件。
1.5 流式细胞仪检测细胞周期
收集三组细胞，调整细胞浓度为1×106/L，冷PBS 洗涤2 次, 加入70 %的冷乙醇(4 ℃) 固定24 h后，洗涤细胞，与含10 μg/ ml RNA 酶的Tris-HCL缓冲液(pH7. 4) 共同孵育30 min。50μg/ ml 碘化丙啶( PI)进行细胞的DNA 染色，1 h 内通过流式细胞仪分析细胞的DNA含量分布，并计算出各个周期细胞所占的百分率。
1.6 MTT检测干扰Survivin后A549对吉非替尼的敏感性
细胞转染干扰质粒48 h后，收集转染和未转染的A549细胞， 接种于96孔板 ， 每个样本做3个复孔， 当细胞贴壁后，加 入不 同浓度的吉非替尼 (2.5、5、10 、20 μmol/ L )培养48 h ；每孔加MT T 20μl (浓度为5mg/ml)，放置孵箱内4h后弃上清加入10%的SDS(十二烷基磺酸钠)200μl，过夜。震荡15min，用全自动酶标仪(检测490nm处的吸光度值(A值)。抑制率(%)=(A对照-A实验)/(A对照-A空白)×100%。
1.7平板克隆检测干扰Survivin后A549对吉非替尼的敏感性
细胞转染干扰质粒48 h后，收集转染和未转染的A549细胞， 接种于6孔板 ， 每个样本做3个复孔， 细胞贴壁后，加入不 同浓度的吉非替尼 (2.5、5、10 、20 μmol/ L )培养中培养7天，去除培养液，PBS洗2次，95%乙醇固定10 min，吉姆萨染液染色10 min，自来水冲洗后，晾干，通过Quantity One软件计算克隆数。克隆形成抑制率(%)=1-(实验组克隆数/对照组克隆数)×100%。
1.8 统计学处理
本研究采用SPSS14.0统计软件进行分析 ......
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