通用模板实时PCR法对YMDD突变的检测(2)
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3 讨论
为了对拉米夫定治疗前及治疗过程中YMDD突变进行检测并量化结果，需要一种比测序法和RFLP更准确快速的方法。实时UT-PCR技术已经在大量病人中用于YMDD突变的检测，检测极限为103copies/mL的突变体，在105 copies/mL血清的混合病毒群体中，可检测出1%的突变，实时UT-PCR技术比测序法更灵敏。除此之外，检测结果通过突变管和对照管之间Ct值的差异可以很容易判读出来，而不需要定量标准【5，6】。
实时UT-PCR方法有两大主要优点：一是通用探针可以检测很多靶序列；二是与其他序列特异性荧光PCR技术相比，价格便宜【7，8】。本研究中检测不同YMDD突变采用的是针对各自靶DNA特异性引物和与通用模板互补的特异性探针。对于同时检测不同的序列，这种方法是经济便捷的。
本研究中接受拉米夫定治疗1年和2年的患者发生YMDD突变的比例分别是19%和40%，这与以往发表过的研究结果一致。在3例患者样本中发现有YIDD、YVDD混合突变。
本研究中用于检测rtM2041的引物是根据ATT序列设计的，所以检测不到ATG和ATC对应的基因序列 ......
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