大鼠大脑皮层星形胶质细胞不同体外培养方法对GFAP表达的影响(2)
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参见附件。
1.2.4 细胞GFAP表达的检测 接种24h后,4%多聚甲醛固定,洗涤;加入封闭液封闭60 min,洗涤3次,每次5 min;用稀释50倍兔抗人GFAP一抗作用60 min,洗涤加入稀释500倍Cy3标记的IgG二抗,避光作用60 min,洗涤(同上);滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片。在荧光显微镜下(200倍),每个标本随机取3个视野,用图像采集处理系统记录每个视野的荧光强度值,以平均荧光强度值表示该标本的GFAP表达相对水平。
1.3统计学方法 应用SAS8.1统计软件进行数据分析,计量资料实验数据采用均数±标准差( )表示。两变量采用t检验,P <0.05认为差异有统计学意义。
2结果
传代后,星形胶质细胞胞体较大而扁,形状不规则,胞质较丰富,细胞核圆形或卵圆形,常偏于胞体的一侧,内有1~2个核仁,经GFAP特异性标记抗体的免疫荧光染色以及DAPI染色后,荧光显微镜观察可见:两种培养方法特异性染色的GFAP亮度不同,但统计分析示:GFAP阳性细胞率震荡纯化为(98.3±0.9)%、传代纯化为(97.0±1.1)%(P > 0.05),(见图1,图2)。提示不同的培养方法对Ast的纯化没有影响。
3讨论
在中枢神经系统中,胶质细胞是主要的组成部分,其中星形胶质细胞(Ast)在中枢神经系统中发挥着多种作用。在受到一定程度的刺激时,星形胶质细胞会表现出胞体变大,突触变长,交织成网的“反应性星形胶质细胞”的形态特征 ......
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