ATRA联合L-OHP对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用(1)
【摘 要】目的：研究全反式维甲酸(ATRA)联合奥沙利铂(L-OHP)对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用。方法：将人肝癌细胞株SMMC-7721用含有胎牛血清的培养液培养后，用MTT法对不同样品试剂对细胞的抑制作用进行检测。结果：培养48 h后ATRA组与L-OHP组一部分细胞凋亡;联合各组细胞明显减少;但在作用72 h后，各组凋亡细胞无显著增加。48 h时各组药物对SMMC-7721细胞的抑制作用最明显;ATRA联合L-OHP各组的作用最显著，与其他组相比，P<0.05;各联合组之间无显著差异。结论：ATRA联合L-OHP可加强对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用。
【关键字】ATRA;L-OHP;人肝癌细胞SMMC-7721;抑制作用
【Abstract】Objective： To study the inhibition effect of Tretinoin(ATRA) combined with third Oxalipatin(L-OHP) on human hepatocellular carcinoma cells SMMC-7721. Methods： Human hepatocellular carcinoma cell line SMMC-7721 was cultured in a medium containing fetal bovine serum， and the inhibitory effects of different sample agents on the cells were detected by MTT method. Results： After 48 hours of incubation， some cells in ATRA group and L-OHP group were broken and apoptotic， while the number of cells in combination group decreased significantly; but there was no significant increase in apoptotic cells in each group after 72 hours of incubation. At 48 hours， the inhibition of each group on SMMC-7721 cells was the most obvious. Compared with other groups， the effect of ATRA combined with L-OHP was the most significant， P < 0.05; but there was no significant difference among the combined groups. Conclusion： ATRA combined with the third generation platinum anticancer compounds can enhance the inhibition of human hepatocellular carcinoma SMMC-7721 cells.
【Key words】 ATRA; L-OHP; Human hepatocellular carcinoma cells SMMC-7721; Inhibition
肝癌，包括原發性肝癌和转移性肝癌两种，人们常说的肝癌多指原发性肝癌，而原发性肝癌85%-90%为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)，是我国最常见的恶性肿瘤之一。当机体组织细胞不受体内调节机制的控制，发生多次遗传突变和积累，则产生癌变，而从细胞凋亡的角度来看，肿瘤的发生是由于凋亡受阻所致。因此，选择性诱导肿瘤细胞凋亡已成为治疗恶性肿瘤的重要手段之一。有研究文献资料表明[1]，全反式维甲酸(Tretinoin， ATRA)可诱导肿瘤细胞分化和凋亡。奥沙利铂(Oxalipatin， L-OHP) 属第3代铂类抗肿瘤化合物，可抑制DNA的合成，产生细胞毒作用及诱导细胞凋亡的作用[2]。本研究通过比较不同样品试剂对肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用，探讨ATRA联合L-OHP能否加强对人肝癌细胞的抑制作用，为药物联合使用治疗肝细胞癌提供线索和参考依据。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1实验材料 人肝癌细胞株SMMC-7721购自中科院上海药物研究所;胎牛血清、胰蛋白酶、DMEM高糖培养基均购自美国Hyclone公司;ATRA、四甲基偶氮唑盐(MTT)、二甲
基亚砜(DMSO)均购自美国Sigma公司， 其中，ATRA用无水乙醇配制成浓度为10-2mol/L、MTT用PBS液配制成浓度5 g/L、DMSO除菌后，于-20 ℃冰箱中存储;注射用奥沙利铂(0.1/支)，齐鲁制药(海南)有限公司，生产批号：EA2E7001A。
1.1.2 实验仪器 BKQ-B50II立式高压蒸汽灭菌器，博科控股集团有限公司;SW-CJ-1BU单人单面净化工作台，浙江孚夏医疗科技有限公司;37XB倒置显微镜，上海永享光学仪器制造有限公司;移液器，上海荣泰生化工程有限公司;GZX-GF-MBS-1电热恒温鼓风干燥箱，上海跃进医疗器械厂;TGL-18M高速台式冷冻离心机，上海卢湘仪离心机仪器有限公司;优普UPR-II-5TNZ纯水机，四川优普超纯科技有限公司;BDF-86V158立式实验室冰箱，博科控股集团有限公司;SP-756P紫外可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司。
1.2实验方法
1.2.1细胞复苏、培养 常规消毒超净台，取出装有人肝癌细胞株SMMC-7721的冻存管，迅速放入37℃水浴，轻轻摇动冻存管使细胞悬液融化，于超净台内将细胞悬液移至10 mL的离心管内，用含10%胎牛血清的DMEM高糖完全培养液稀释至原体积的4倍，1000 rpm离心5 min，弃上清液后加新鲜培养液，轻轻吹打使沉于离心管底部的细胞变为混悬状态，后将细胞悬液转移至培养瓶内，将培养瓶放置37℃、5%CO2培养箱内培养，保持较高的细胞密度，用 0.25%胰蛋白酶消化，传代(观察细胞生长情况，当细胞铺满瓶底或液体变黄，则传代、更换培养液)。, 百拇医药(赵品勇 孟祥林 周燕萍)
【关键字】ATRA;L-OHP;人肝癌细胞SMMC-7721;抑制作用
【Abstract】Objective： To study the inhibition effect of Tretinoin(ATRA) combined with third Oxalipatin(L-OHP) on human hepatocellular carcinoma cells SMMC-7721. Methods： Human hepatocellular carcinoma cell line SMMC-7721 was cultured in a medium containing fetal bovine serum， and the inhibitory effects of different sample agents on the cells were detected by MTT method. Results： After 48 hours of incubation， some cells in ATRA group and L-OHP group were broken and apoptotic， while the number of cells in combination group decreased significantly; but there was no significant increase in apoptotic cells in each group after 72 hours of incubation. At 48 hours， the inhibition of each group on SMMC-7721 cells was the most obvious. Compared with other groups， the effect of ATRA combined with L-OHP was the most significant， P < 0.05; but there was no significant difference among the combined groups. Conclusion： ATRA combined with the third generation platinum anticancer compounds can enhance the inhibition of human hepatocellular carcinoma SMMC-7721 cells.
【Key words】 ATRA; L-OHP; Human hepatocellular carcinoma cells SMMC-7721; Inhibition
肝癌，包括原發性肝癌和转移性肝癌两种，人们常说的肝癌多指原发性肝癌，而原发性肝癌85%-90%为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)，是我国最常见的恶性肿瘤之一。当机体组织细胞不受体内调节机制的控制，发生多次遗传突变和积累，则产生癌变，而从细胞凋亡的角度来看，肿瘤的发生是由于凋亡受阻所致。因此，选择性诱导肿瘤细胞凋亡已成为治疗恶性肿瘤的重要手段之一。有研究文献资料表明[1]，全反式维甲酸(Tretinoin， ATRA)可诱导肿瘤细胞分化和凋亡。奥沙利铂(Oxalipatin， L-OHP) 属第3代铂类抗肿瘤化合物，可抑制DNA的合成，产生细胞毒作用及诱导细胞凋亡的作用[2]。本研究通过比较不同样品试剂对肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用，探讨ATRA联合L-OHP能否加强对人肝癌细胞的抑制作用，为药物联合使用治疗肝细胞癌提供线索和参考依据。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1实验材料 人肝癌细胞株SMMC-7721购自中科院上海药物研究所;胎牛血清、胰蛋白酶、DMEM高糖培养基均购自美国Hyclone公司;ATRA、四甲基偶氮唑盐(MTT)、二甲
基亚砜(DMSO)均购自美国Sigma公司， 其中，ATRA用无水乙醇配制成浓度为10-2mol/L、MTT用PBS液配制成浓度5 g/L、DMSO除菌后，于-20 ℃冰箱中存储;注射用奥沙利铂(0.1/支)，齐鲁制药(海南)有限公司，生产批号：EA2E7001A。
1.1.2 实验仪器 BKQ-B50II立式高压蒸汽灭菌器，博科控股集团有限公司;SW-CJ-1BU单人单面净化工作台，浙江孚夏医疗科技有限公司;37XB倒置显微镜，上海永享光学仪器制造有限公司;移液器，上海荣泰生化工程有限公司;GZX-GF-MBS-1电热恒温鼓风干燥箱，上海跃进医疗器械厂;TGL-18M高速台式冷冻离心机，上海卢湘仪离心机仪器有限公司;优普UPR-II-5TNZ纯水机，四川优普超纯科技有限公司;BDF-86V158立式实验室冰箱，博科控股集团有限公司;SP-756P紫外可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司。
1.2实验方法
1.2.1细胞复苏、培养 常规消毒超净台，取出装有人肝癌细胞株SMMC-7721的冻存管，迅速放入37℃水浴，轻轻摇动冻存管使细胞悬液融化，于超净台内将细胞悬液移至10 mL的离心管内，用含10%胎牛血清的DMEM高糖完全培养液稀释至原体积的4倍，1000 rpm离心5 min，弃上清液后加新鲜培养液，轻轻吹打使沉于离心管底部的细胞变为混悬状态，后将细胞悬液转移至培养瓶内，将培养瓶放置37℃、5%CO2培养箱内培养，保持较高的细胞密度，用 0.25%胰蛋白酶消化，传代(观察细胞生长情况，当细胞铺满瓶底或液体变黄，则传代、更换培养液)。, 百拇医药(赵品勇 孟祥林 周燕萍)
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