VEGF—C和VEGFR—3在宫颈增生性病变活检组织中的表达及其意义(2)
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1 材料与方法
1.1 临床资料 收集寿光市人民医院2009年6月-2011年3月间宫颈活检标本111例，其中宫颈炎性、修复性增生组织15例；宫颈上皮内瘤变组织44例(CINI 10例，CINII 16例，CINIII 18例)；宫颈鳞癌组织51例(患者年龄21-82岁，平均51.2岁)。后经宫颈癌根治手术切除证实。根据2000年FIGO制定标准进行临床分期I期24例，Ⅱ期17例，Ⅲ期10例；按组织学分级，高分化鳞癌13例，中、低分化鳞癌38例；有淋巴结转移18例，无淋巴结转移33例；术前均无放疗和化疗史。
1.2 试剂 VEGF-C抗体为兔抗人多克隆抗体(稀释度为1：150)；VEGFR-3抗体为兔抗人多克隆抗体，免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 免疫组化方法 将通过中性福尔马林固定，石蜡包埋处理的宫颈活检标本连续切片三张，厚度为4um。采用SP免疫组化染色方法，热修复，抗原修复液为PH6.0的柠檬酸缓冲液，用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照，经DAB显色，苏木精对比染色后，中性树胶封片，具体步骤从略。用已知阳性片作为阳性对照。
1.4 结果判定 (1)VEGF-C的着色以胞浆呈棕黄色颗粒为准，分布相似。根据Beeasley免疫染色评分方法，按阳性细胞所见百分比并参考着色强度判断分级。无明显着色阳性细胞为(-)，阳性细胞数<25%为(+)，25%-50%为(++)，>50%为(+++)。(2)VEGFR-3阳性为脉管内皮细胞质内出现棕黄色颗粒。VEGFR-3脉管判断标准及计数方法，低倍镜下寻找VEGFR-3阳性脉管密集区 ......
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