内皮型一氧化氮基因G894T多态性与大连汉族人原发性高血压的关系研究
【摘 要】 目的 探讨大连地区汉族人内皮型一氧化氮基因G894T多态性与原发性高血压之间的关系。方法 Chelex-100法抽提DNA，测定100名高血压患者及健康对照的基因分型，并测定其性别、年龄、体重、血脂等指标。结果 观察组的GT、TT基因型及T等位基因频率均高于正常对照组，P<0.05。结论 一氧化氮合酶基因G894T多态性可能是大连地区汉族人高血压的一种遗传敏感性指标。
【关键词】 高血压;基因顺应性;一氧化氮合酶
【中图分类号】 R544.1 【文献标识码】 A
高血压病是多基因遗传性疾病，基因和基因、环境和基因的相互影响的复杂性导致各人群间的易感基因不同。内皮型一氧化氮合酶(eNOS)属NOS家族，定位于染色体7q35-36，包含有26个外显子和25个内含子，全长约21-22kb，翻译生成的蛋白质产物为1203个氨基酸。至今为止，发现该基因存在近10个多态性位点，而第7核苷酸894处的G被T等位基因所代替后，以致第298号氨基酸由Glu变为Asp[1]。以往的国内外学者研究发现，该基因G894T多态性和原发性高血压密切相关，并具备种族及地区特异性。本人旨在研究大连地区eNOS基因G894T多态性与原发病高血压之间的关系。
1 资料与方法
1.1 病例选择 高血压和正常对照组各100例，男、女各50例，年龄40～65岁。排除标准：患糖尿病、继发性高血压以及严重临床重要疾病(如心脑血管疾病、肝肾及外周血管疾病等)。
1.2 Chelex-100法抽提DNA
1.3 基因型测定上下游引物分别是：5’-TCCCTgAggAgggCATgAggC-3’，5’-TgAgggTCACACAggTTCCT-3’。PCR反应体系：50uL反应体系，加超纯水至50ul，混匀后离心。预变性94℃需4min;而后变性94℃ 需0.5 min，退火55℃需1min，延伸72℃需1min，35个循环;最后72℃延伸时间为5min，扩增产物糖凝胶电泳后再采用EB染色。取PCR产物10uL，限制性内切酶BanII 0.5uL，10xBuffer1.5uL，灭菌去离子双蒸水2.9uL，反应总体积共15uL，混匀离心30s，37℃恒温箱孵育2小时。根据条带个数确定G、T基因型。
1.4 统计学分析 SPSS11.0软件包，用均数±标准差分析计量资料，用t检验或方差分析组间计量资料，X2检验分析计数资料。
2 结果
观察组和健康对照eNOS各基因型的频率比较，观察组和对照组的eNOS基因G894T基因型构成比有统计学差异(P<0.05)，前者GT、TT基因型频率及T等位基因频率均显著高于对照组，有统计学意义，(P<0.05)(见表1)。
3 讨论
作为高血压的一个重要候选基因，eNOS已引起国内外很多学者的广泛关注，其中，G894T多态性对原发性高血压影响的研究结论各不相同。张丽萍[2]等发现，G894T多态性可能是中国新疆维吾尔族人群高血压的一种遗传易感性指标，T等位基因频率在EH和正常组分别是29.33%、22.83%，明显高于刘海珍[3]等研究的中国汉族人群(26.2%、12.8%)。但谭建聪等[4]发现该基因多态性与重庆市高血压患者无明显关联。陈丽娜等[5]对宁夏回族的研究结果表明，回族高血压组GG、GT、TT基因型分别频率为0.831、0.142和0，两组间基因频率差异亦无统计学差异。梁荣等[6]对天津的高血压人群分析，提示G894T多态性与原发性高血压无关。分析其差异的原因，可能与环境、生活习惯及遗传结构等因素相关。随着血管生物学与临床医学领域联合研究发展，对基因可能会需要更深入的临床试验。
综上所述，不同种族、不同地域的eNOS等位基因频率不一致，报道结论不一。该研究提示eNOS基因G894T多态性与大连地区汉族人的原发性高血压相关，具有统计学意义。不足之处的是，该研究样本量较小，故需进行大样本的研究来进一步确定其相关性。
参考文献
[1] 崔美善.内皮型一氧化氮基因多态性与原发性高血压的相关性[J].中国心血管病研究，2014，12(4)：362-364.
[2] 张丽萍.内皮型一氧化氮基因G894T多态性与新疆维吾尔族原发性高血压的关联研究[J].中华心血管病杂志，2006，34(5)：403-406.
[3] 刘海珍.内皮型一氧化氮基因G894T多态性与原发性高血压的关系研究[J].中国循环杂志，2002，17(5)：361-363.
[4] 谭建聪.重庆市部分高血压患者内皮型一氧化氮基因G894T多态性与相关危险因素的研究[J].中华流行病学杂志，2004，25(2)：158-161.
[5] 陈丽娜.内皮型一氧化氮基因G894T多态性与宁夏回族原发性高血压的相关性[J].实用医学杂志，2012，28(7)：1107-1109.
[6] 梁荣.内皮型一氧化氮基因多态性与原发性高血压的关系研究[J].天津医药，2012，40(10)：1015-1107., 百拇医药(惠慧 林海龙 潘晓芳 贾晓东 徐鹤)
【关键词】 高血压;基因顺应性;一氧化氮合酶
【中图分类号】 R544.1 【文献标识码】 A
高血压病是多基因遗传性疾病，基因和基因、环境和基因的相互影响的复杂性导致各人群间的易感基因不同。内皮型一氧化氮合酶(eNOS)属NOS家族，定位于染色体7q35-36，包含有26个外显子和25个内含子，全长约21-22kb，翻译生成的蛋白质产物为1203个氨基酸。至今为止，发现该基因存在近10个多态性位点，而第7核苷酸894处的G被T等位基因所代替后，以致第298号氨基酸由Glu变为Asp[1]。以往的国内外学者研究发现，该基因G894T多态性和原发性高血压密切相关，并具备种族及地区特异性。本人旨在研究大连地区eNOS基因G894T多态性与原发病高血压之间的关系。
1 资料与方法
1.1 病例选择 高血压和正常对照组各100例，男、女各50例，年龄40～65岁。排除标准：患糖尿病、继发性高血压以及严重临床重要疾病(如心脑血管疾病、肝肾及外周血管疾病等)。
1.2 Chelex-100法抽提DNA
1.3 基因型测定上下游引物分别是：5’-TCCCTgAggAgggCATgAggC-3’，5’-TgAgggTCACACAggTTCCT-3’。PCR反应体系：50uL反应体系，加超纯水至50ul，混匀后离心。预变性94℃需4min;而后变性94℃ 需0.5 min，退火55℃需1min，延伸72℃需1min，35个循环;最后72℃延伸时间为5min，扩增产物糖凝胶电泳后再采用EB染色。取PCR产物10uL，限制性内切酶BanII 0.5uL，10xBuffer1.5uL，灭菌去离子双蒸水2.9uL，反应总体积共15uL，混匀离心30s，37℃恒温箱孵育2小时。根据条带个数确定G、T基因型。
1.4 统计学分析 SPSS11.0软件包，用均数±标准差分析计量资料，用t检验或方差分析组间计量资料，X2检验分析计数资料。
2 结果
观察组和健康对照eNOS各基因型的频率比较，观察组和对照组的eNOS基因G894T基因型构成比有统计学差异(P<0.05)，前者GT、TT基因型频率及T等位基因频率均显著高于对照组，有统计学意义，(P<0.05)(见表1)。
3 讨论
作为高血压的一个重要候选基因，eNOS已引起国内外很多学者的广泛关注，其中，G894T多态性对原发性高血压影响的研究结论各不相同。张丽萍[2]等发现，G894T多态性可能是中国新疆维吾尔族人群高血压的一种遗传易感性指标，T等位基因频率在EH和正常组分别是29.33%、22.83%，明显高于刘海珍[3]等研究的中国汉族人群(26.2%、12.8%)。但谭建聪等[4]发现该基因多态性与重庆市高血压患者无明显关联。陈丽娜等[5]对宁夏回族的研究结果表明，回族高血压组GG、GT、TT基因型分别频率为0.831、0.142和0，两组间基因频率差异亦无统计学差异。梁荣等[6]对天津的高血压人群分析，提示G894T多态性与原发性高血压无关。分析其差异的原因，可能与环境、生活习惯及遗传结构等因素相关。随着血管生物学与临床医学领域联合研究发展，对基因可能会需要更深入的临床试验。
综上所述，不同种族、不同地域的eNOS等位基因频率不一致，报道结论不一。该研究提示eNOS基因G894T多态性与大连地区汉族人的原发性高血压相关，具有统计学意义。不足之处的是，该研究样本量较小，故需进行大样本的研究来进一步确定其相关性。
参考文献
[1] 崔美善.内皮型一氧化氮基因多态性与原发性高血压的相关性[J].中国心血管病研究，2014，12(4)：362-364.
[2] 张丽萍.内皮型一氧化氮基因G894T多态性与新疆维吾尔族原发性高血压的关联研究[J].中华心血管病杂志，2006，34(5)：403-406.
[3] 刘海珍.内皮型一氧化氮基因G894T多态性与原发性高血压的关系研究[J].中国循环杂志，2002，17(5)：361-363.
[4] 谭建聪.重庆市部分高血压患者内皮型一氧化氮基因G894T多态性与相关危险因素的研究[J].中华流行病学杂志，2004，25(2)：158-161.
[5] 陈丽娜.内皮型一氧化氮基因G894T多态性与宁夏回族原发性高血压的相关性[J].实用医学杂志，2012，28(7)：1107-1109.
[6] 梁荣.内皮型一氧化氮基因多态性与原发性高血压的关系研究[J].天津医药，2012，40(10)：1015-1107., 百拇医药(惠慧 林海龙 潘晓芳 贾晓东 徐鹤)