微流芯片检测流感病毒多重逆转录聚合酶链反应产物的实验研究
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居丽雯 蒋露芳 陈民 杨国翠 林玉尊 朱炜明 姜庆五 复旦大学公共卫生学院 复旦大学公共卫生学院 复旦大学公共卫生学院 复旦大学公共卫生学院 复旦大学公共卫生学院 复旦大学公共卫生学院 复旦大学公共卫生学院
【摘要】[目的 ]建立应用微流芯片检测甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒多重逆转录聚合酶链反应 (mRT -PCR)产物的方法 ,在mRT -PCR扩增核酸的基础上自动化灵敏的定量检测扩增产物 ,快速检测甲亚型、乙型流感病毒 ,帮助临床快速诊断和鉴别诊断其他呼吸道病毒感染 ,以及明确流感病毒在人群中感染、流行情况。 [方法 ]采用经MDCK细胞分离培养的甲 1型、甲 3型、乙型流感病毒毒株病毒液 ,使用 3组特异引物经mRT -PCR扩增核酸 ,扩增产物分别采用毛细管电泳技术经Caliper10 0 0微流芯片分析仪自动化检测和经 2 %琼脂糖凝胶电泳法检测。[结果 ]设计三组引物对相应甲 1
【关键词】 微流芯片 多重逆转录聚合酶链反应 流感病毒
【分类号】R117
流感病毒至今仍是全球引起重型呼吸道疾病的重要病原体,一直是WHO呼吸道病毒监测项目的重点。流感病毒检测可通过鸡胚或细胞培养分离、单克隆荧光抗体染色或ELISA、EIA等免疫学方法检测蛋白抗原、同时也可通过逆转录聚合酶链反应检测核酸。多重逆转录聚合酶链反应(mRT -PCR)
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摘要：[目的]建立应用微流芯片检测甲1型、甲3型、乙型流感病毒多重逆转录聚合酶链反应(mRT-PCR)产物的方法，在mRT-PCR扩增核酸的基础上自动化录敏的定量检测扩增产物，快速检测甲亚洲、已型流感病毒，帮助临床快速诊断和鉴别诊断其他和呼吸道病毒感染，以及明确流感病毒在人群中感染、流行情况。[方法]采用经MDCK细胞分离培养的甲1型、甲3型、已型流感病毒毒株病毒液，使用3组特异引物经mRT-PCR扩增枋酸，扩增产物分别采用毛细管电泳技术经Caliper1000微流芯片分析仪自动化检验和经2%琼脂糖凝胶电泳法检测。[结果]设计三组引物对相应甲1型、甲3型、已型流感病毒靶基因的mRT-PCR扩增产物片段分别为430bp、210bp、391bp，本实验mRT-PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，与Marker比照，DNA条带基本在此位点附近；产物采用毛细血管电泳法经Caliper1000微流芯征分析仪后，分别于413bp、203bp、379bp出现陡峭的峰，如图所示。[结论]应用微流芯片采用毛细血管电泳法可对流感病毒mRT-PCR产物进行定位及相对定量，有助于快速诊断病毒感染，有助于对流感的临测。
关键词：微流芯片；多重逆转录聚合酶链反应；流感病毒
中图分类号：R117 文献标识码：A 文章编号：1004-9231(2004)04-0157-04
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