荧光定量ＰＣＲ方法在沙门菌鉴定中的应用
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赵雪涛 陈军 刘志勇 上海市徐汇区疾病预防控制中心 上海市黄浦区卫生检验所 上海市徐汇区疾病预防控制中心
【摘要】[目的 ]用taqman技术建立沙门菌荧光定量聚合酶链反应 (PCR)检测方法 ,尝试快速、准确地鉴定沙门菌。 [方法 ]根据沙门菌GenBankAccessionNOU2 5 3 5 2基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的沙门菌基因片段克隆导入载体 ,构建的重组质粒经筛选、鉴定后 ,作为阳性模板 ,用于标准曲线的制定。利用荧光定量聚合酶链反应 (PCR)技术进行各类菌株的定性鉴定。 [结果 ]应用重组质粒制作的定量曲线 ,其循环阈值与模板浓度的对数值具有良好的线性关系 ,相关系数为 0 .999。检测各类菌株 ,其中沙门菌 41株、H抗原丢失的沙门菌 16株均阳性 ;非沙门菌 10 9株均阴性。 [结论 ]建立了鉴定沙门菌的荧光定量PCR方法 ,该方法简便、快速、准确 ,有很好的应用前景和研究价值
【关键词】 荧光定量聚合酶链反应 沙门菌 荧光标记探针
【分类号】Q93-3
沙门菌的传统鉴定方法首先要挑取单个菌落进行生化方面的表型实验 ,而后利用血清凝集进行抗原表型的实验 ;此外还有以沙门菌噬菌体裂解的特定模式作为鉴定的手段。以上方法是针对沙门菌各类表型特征来进行鉴定 ,由于方法本身的特异性问题以及需要细菌培养过程 ,或由于细菌表
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摘要： [目的] 用taqman技术建立沙门菌荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法，尝试快速、准确地鉴定沙门菌。 [方法] 根据沙门菌GenBankAccessionNOU25352基因序列，设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的沙门菌基因片段克隆导入载体，构建的重组质粒经筛选、鉴定后，作为阳性模板，用于标准曲线的制定。利用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术进行各类菌株的定性鉴定。 [结果] 应用重组质粒制作的定量曲线，其循环阈值与模板浓度的对数值具有良好的线性关系，相关系数为0.999。检测各类菌株，其中沙门菌41株、H抗原丢失的沙门菌16株均阳性；非沙门菌109株均阴性。 [结论] 建立了鉴定沙门菌的荧光定量PCR方法，该方法简便、快速、准确，有很好的应用前景和研究价值。
关键词： 荧光定量聚合酶链反应； 沙门菌； 荧光标记探针
中图分类号： Q 503 文献标识码： A
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