奶粉中二噁英前处理方法的探讨(2)
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表2理论的离子丰度比和控制限
① 质控限是理论的离子丰度比例的15%；② 不应用净化标准(37Cl4-2,3,7,8-TCDD)；③只用13C12-HxCDF；④只用13C12-HpCDF同时满足以上两个条件，方可认为被测物质与标准相同。
②定量：每一化合物测定按同位素稀释内标计算，1,2,3,7,8,9-HXCDD、OCDF和标记化合物中的每一物质的浓度用内标记技术计算。C，pg/g=SUMA×SPAisSUMAis×RRFs×VW
C：待测二噁英在样品中之浓度，以(pg/g)计。SUMA：样品峰面积。SPAis：样品中加入3.4.2中13C回收率内标物浓度(ng/mL)。SUMAis：样品中加入3.4.2中13C回收率内标物峰面积。EVRRRFs：校准标准中未标记物的平均响应因子。V：样品进样前的定容体积(μL)。W：样品重量(g)。
1.2.8计算结果表示
以样品实际重量作为基础计算(pg/g样品) 。以脂肪含量作为基础计算计(pg/g脂肪)(样品中脂肪含量测定参照食品中脂肪的测定方法GB 5009.6-2003)。以毒性当量浓度计算(pgTEQ/g)。根据毒性当量系数(TEF)，见表3。公式如下：
Ci：与下表中对应的二噁英在样品中之浓度，以(pg/g)计。TEF：单个二噁英化合物其毒性相当于2,3,7,8-TCDD的系数。
表3WHO1997年提供的毒性当量因子[2]
2 结果与讨论
2.1 不同提取方法的比较
二噁英的分析是属于超痕量(pg～fg)、多组分(210个同系物、异构体的分离)和复杂的前处理技术，对特异性、选择性和灵敏度的要求相当高，成为当今世界分析领域的难点。奶粉中二噁英类化合物的测定方法报道的并不多，但食品中二噁英类化合物的测定方法比较多。二噁英的分析主要包括样品提取、净化、分离及定量测定。样品的提取目前所采用的手段有索氏提取、快速溶剂萃取、微波溶剂萃取、固液萃取、超声萃取、柱上直接提取、酸介法和碱介法等，提取溶剂也各不相同，主要有正己烷：二氯甲烷(1：1)，正己烷：丙酮(1：1)，正己烷：乙酸乙酯(1：1)，甲苯：甲醇(87：13)等体系，根据不同的样品选择不同的溶剂。本文主要就酸介法和碱介法、索氏提取、快速溶剂萃取、超声萃取进行了研究。
2.1.1 提取方法的研究 表4结果可以验证文献报道的结论[3]，碱介法可能会导致高氯代二噁英脱氯转为低氯代二噁英，使结果偏高。酸介法杂质干扰比较多，使回收率偏高。
表4酸介法和碱介法的提取效率比较
(以碳13标记化合物的回收率表示)
表5结果显示，索氏提取、快速溶剂提取的回收率比较高，差异无显著性，索氏提取、超声提取的回收率明显低于索氏提取、快速溶剂提取。但三种提取方法的内标记化合物的回收率均在美国环保局EPA Method 1613给出的回收率范围(%)。而欧盟给出的内标记化合物的回收率应大于60%，对于7氯代以后的化合物可以适当放宽。因为美国环保局EPA Method 1613是一个原则性方法，它适用于废水、土壤、底泥等环境样品，而欧盟的方法适用于食品中[4]。基于这个原因，本方法选用索氏提取和快速溶剂提取。
表5 不同提取方式标准参考物的样品回收率(n=3)
2.1.2 不同提取溶剂的比较 主要考虑正己烷和二氯甲烷体系及甲苯体系，正己烷和二氯甲烷体系对脂肪有很好的提取效率，甲苯体系除脂肪外芳香烃类的化合物也有很好的提取效率。我们选用甲苯和正己烷：二氯甲烷体系(1：1)作为提取溶剂进行比较，结果见表6。
表6 不同提取溶剂13C内标记化合物的回收率结果
从以上结果可以看出，低氯代的二噁英，提取溶剂为正己烷：二氯甲烷体系(1：1)比提取溶剂为甲苯得到的回收率高。高氯代的二噁英，提取溶剂为正己烷：二氯甲烷体系(1：1)比提取溶剂为甲苯得到的回收率低。对于化合物毒性来说，低氯代的二噁英远远高于高氯代的二噁英，因此，本标准采用正己烷：二氯甲烷体系(1：1)为提取溶剂。
2.1.3 不同的净化方法的比较 净化分离实验可以选用手动装柱人工分析，也可使用目前机械化程度较高的全自动净化体统(FMS)进行分析。考察净化的回收率，分析结果人工分离与仪器都符合要求，而且分离快速方便、安全可靠、重现性好。见表7。
表7两种分析方法的比较
连续测定5次样品，所得的信噪比的3倍为检出限，10倍为定量限。如取50g样品，定容至10μl，样品的最低检出限和定量限见表8。
2.3 精密度和回收率
2.3.1 仪器精密度 最低浓度CS1重复测定5次标记和未标记化合物的相对标准偏差(RSD)分别在0.5%～14%和4.1%～12.6%，平均分别为6.5%和7.8%，符合美国EPA1613[5]中的要求，见表9。
从以上标准参考物CRM的分析结果可以说明，本方法准确度符合欧盟2002/69/EC[6]规定的<±20%。
通过选用不同的提取方法，不同的提取溶剂进行比较，最终选定了提取效率高且操作方便、实用的加速溶剂萃取，萃取溶液选用正己烷：二氯甲烷体系(1：1)，FMS净化后用高分辨气相色谱(HRGC)和高分辨双聚焦质谱(HRMS)联用技术进行定性和定量分析，能得到满意的结果。
3 参考文献
[1]Rapp, C, Buser, HR, Dodet B, et al. Environmental carcinogens: methods of analysis and exposure measurement ......
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