德尔卑沙门菌PFGE分型探索(2)
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参见附件(371KB,3页)。
1.2.5 染色 电泳结束后用EB溶液染色30~45min,然后用蒸馏水脱色1h,中间至少换一次蒸馏水。
1.2.6 DNA成像及分析用BIO-RAD脉冲凝胶成像系统将电泳后的结果在UV条件下拍摄下来,用Quantity OneTM分析软件对电泳后的条带进行同源性分析。
2结果
经电泳和染色后,使用BIO-RAD凝胶成像分析系统拍摄12株德尔卑沙门菌的DNA指纹图谱,其中第2和第7泳道的菌株DNA未有效分离,不能用于分析,见图1。
图1 12株德尔卑沙门菌的DNA指纹图
Lane 1):D1; Lane 2): bad; Lane 3):D15; Lane 4): D37; Lane 5):D38; Lane6): D39; Lane7): λ DNA MARKER; Lane 8):D40; Lane9):D41; Lane10): bad; Lane 11): D43; Lane12): D44; Lane 13): D45
用Quantity oneTM分析软件对有效分离的10株德尔卑沙门菌的DNA指纹图谱进行DNA同源性分析,结果见图2、图3、表2、表3。
图2 10株德尔卑沙门菌DNA相似度百分比以D1为参照,序号表示泳道的编号(Lane)
图3 10株德尔卑沙门菌DNA相似度百分比以D15为参照,序号表示泳道的编号
表22005年德尔卑沙门菌菌株DNA的相似系数
3 讨论
常规电泳的方法,对大小超过30kb的DNA片段不能有效分离,因为片段太长,在电场作用下会延伸得太宽。1984年,chwarts和Cantor发明了解决这个问题的方法,当电场按不同的方向转换时,DNA以阶梯式的方式在凝胶中运动。因此,这种电泳被称为脉冲凝胶电泳 ......
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