食品中苏丹红的液相色谱三重串联四极杆质谱确认分析
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苏丹红系列是人工合成的偶氮类染料，食品中非法添加苏丹红的主要目的是为了改善和保持色泽。由于其可能致癌的特性，现在越来越受到国内外普遍关注。自2003年4月印度出口的红辣椒制品中发现苏丹红1号之日起，苏丹红事件便屡见不鲜。据报道，辣椒(油)、鸡蛋、鸭蛋、化妆品、腐乳等多种样品中均检出苏丹红。2004年1月，欧盟将辣椒制品的苏丹红检测范围扩大到苏丹红2号、苏丹红3号、苏丹红4号。食品安全体系中痕量违禁化合物分析面临严格的标准和法规要求，欧盟、美国、日本以及我国对进出口农副产品相继采取零风险保护措施。为了应对苏丹红事件，我国在2005年制订了苏丹红检测方法[1]。我们利用LC/MS/MS对食品中苏丹红1号、苏丹红2号、苏丹红3号、苏丹红4号进行确认分析。
1实验
1.1仪器与试剂
仪器：高效液相色谱仪-质谱联用仪(LC/MS/MS)，包括美国Waters 2695高效液相色谱仪，Waters Quattro Micro三重四极杆串联质谱仪，Waters Masslynx 4.1软件系统；混合器，振荡器。
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试剂：乙腈(Merck，Germany，色谱纯)，水(Milipore，US，超级纯)，甲酸(Tedia，USA，HPLC级)，苏丹红1号、2号、3号、4号标准品(Dr.Ehrenstorfer，Germany)。
样品：个人送检、市场监测的样品。
1.2色谱-质谱条件
Waters Xterra Ms C18色谱柱(150mm×2.1mm，5μm)；柱温35℃；流动相A为0.05%的甲酸溶液，流动相B为乙腈，A+B=20+80；流速0.2mL/min；进样量10μL
电喷雾离子化源(ESI)，以正离子模式检测(ESI+)；毛细管电压(capillary)3.0V；锥孔电压(cone)30 V；萃取锥孔电压(Extractor)3.0 V；透镜电压(RF Lens)0.0 V；源温度(Source Temp)100℃；脱溶剂温度(Desovation Temp)350℃；锥孔气流速(Cone Gas Flow)50L/h；脱溶剂气流速(Desolvation Gas Flow)500L/h。
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1.3标样配制
标准贮备液：准确称取苏丹红1号标准品0.0100g，参照欧盟方法(表1)溶解、定容至100mL。2号、3号、4号标准贮备液依以上方法配制。
标准使用液：取4种苏丹红100mg/L的标准贮备液1.00 mL，用乙腈定容到100 mL容量瓶中，混合溶液浓度即为1.00mg/L。
1.4样品前处理
称取10.00g样品于三角瓶中，用量筒加入100mL乙腈，在涡旋式混合器上充分混合1min，然后在振荡器上振荡1h，静置后过滤，进样前适当稀释。
2结果与讨论
2.1标准品定性定量离子确定
, 百拇医药 配制1.0mg/L苏丹红1号标准品，以蠕动泵直接进样，流速为10μL/min，用全扫描模式(Ms Scan)找出准分子离子质谱峰(M+H)。改变监测方式为子离子扫描模式(DAU)，以准分子离子249.2为母离子，进行子离子扫描。子离子扫描结果见图1。选择子离子232.2、156.2、93.1作为多反应检测模式(MRM)监测离子，通过调节碰撞能量找出各离子最佳碰撞电压。配制同浓度苏丹红2号、3号、4号标准溶液重复以上步骤，结果见图2～图4。4种标准品的定性定量离子见表2。
2.2苏丹红4种混合标准溶液色谱条件确定
取苏丹红混合标准使用液，用50%的乙腈溶液成配制20μg/L的标准溶液。进样10μL，通过流动相配比变化以及柱温等变化以优化分离条件，达到较好的分离效果(图5)。图中“#”峰应为Sudan IV所带杂质。
2.3线性范围及检出限
, 百拇医药
用浓度为10.0 μg/L、20μg/L、30μg/L、40μg/L、50μg/L的苏丹红1号、2号、3号、4号标准溶液进样，结果表明在此浓度范围内线性关系较好，相关系数为0.9977~0.9986。
取苏丹红标准贮存液进行各稀释测定，用MRM模式分析不同质量浓度4种苏丹红标准溶液，其检出限见表3。
2.4样品中苏丹红确认检测
分别取混匀的蛋白、蛋黄、辣椒油各20.00g于三角瓶中，用量筒加入100mL乙腈，在涡旋式混合器上充分混合1min，然后在振荡器上振荡1h，静置后过滤到进样瓶中准备进样。蛋黄中检出苏丹红4号，其含量为0.20mg/kg，4件辣椒油样品苏丹红1号、2号、3号、4号均未检出。蛋黄样品质谱结果见图6，阴性辣椒油样品图谱见图7。
苏丹红系列检测方法的研究是近来的热点[2~5]。我国2005年出台的苏丹红染料(1号、2号、3号、4号)的检测方法是以液相色谱配紫外-可见检测器进行定量分析和半定性分析。
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本文关于苏丹红1号、2号、3号、4号的LC/MS/MS测定方法，提高了检测灵敏度，并能够进行疑似样品确认，满足了更高的检测要求。
3参考文献
[1]GB/T 19681-2005，食品中苏丹红染料的检测方法(高效液相色谱法)[S].
[2]王凤池，孙汉文，吕红英，等.食品中苏丹红染料的高效液相色谱-离子阱质谱分析[J].理化检验 化学分册，2005，41(12)：886-889.
[3]喻凌寒，宋之光，苏流坤，等.高效液相色谱-离子阱质谱联用测定食品中7种苏丹红类染料[J]. 质谱学报, 2006，27(04):221-225.
[4]张裕平，张毅军，袁倬斌，等. 高效液相色谱法测定红辣椒制品中的苏丹红[J].生命科学仪器, 2005，03(03):25-28.
[5]刘永波，赵海峰，张明霞. 超声波提取-气相色谱-质谱联用法测定苏丹红Ⅰ残留量[J].分析试验室, 2006，25(04):86-88.
(收稿日期：2007-04-30), http://www.100md.com(王春民 张秋萍 丁建森 李 建)